广西巴马小型猪-1，3半乳糖转移酶基因的克隆及其在动物体内的表达和功能研究.pdfVIP

广西巴马小型猪d-1，3半乳糖转移酶基因的克隆及其在动物 体内的表达和功能研究 摘要 编码的a-1，3半乳糖转移酶会在猪细胞表面的糖脂类或糖蛋白的N一乙 半乳糖基，形成a-Gal双糖抗原表位。该抗原表位能与相应的抗体结合， 引发抗原抗体反应。人、大猩猩和狭鼻猴等旧大陆猴的GGTAl由于碱基 突变而失去表达活性，变为假基因。并且人体内存在大量的anti—Gal 抗体，这导致了以猪器官作为移植供体时人体易发生超急性排斥反应。 巴马小型猪肾脏、肝脏、卵巢和肺组织中的总RNA为模板，进行RT-PCR 扩增。产物经纯化，连接，转化和扩增后测序。结果显示：成功克隆 第五外显子。 ＼、 为探讨广西巴马小型猪GGTAl基因外显子五缺失的机理，本研究随 机采集了广西巴马小型猪近交系和封闭群血样各10头，外来纯种大约 列及周围部分内含子序列进行了PCR—SSCP分析。结合测序结果显示， 扩增获得的165bp序列没有品种间和品种内多态性，外显子5在本地猪 种内的转录缺失可能为选择性剪接的作用。 为探明GGTAl在猪各组织中的表达和分布情况，本实验采用实时 定量PCR方法对本地两个小型猪品种～巴马小型猪、环江香猪和一个 外来品种大约克猪的主动脉、前腔静脉、心脏、肺脏、肝脏、肾脏、 气管、胃等部位组织GGTAl相对表达量进行研究。结果表明：GGTAl 在三个品种猪的8个组织器官中均有表达，其中前腔静脉表达量最高， 其次是肝脏、胃、肺、肾脏、主动脉、心脏，在气管的表达量最低。 表达模式具有相当的保守性，提示在猪机体内该基因可能发挥着比较 重要的生物学功能。 为进一步研究a．1，3半乳糖转移酶在机体中的功能情况，以及本地 猪种编码序列的缺失可能造成的对酶活性的影响。本研究对三个品种 猪机体中主动脉、前腔静脉、心脏、肺脏、肝脏、肾脏、气管、胃等 组织的0【．1，3半乳糖转移酶催化产物0【．Gal抗原表位进行免疫组织化学 分析。结果表明：猪体内的0【．1，3半乳糖转移酶在表达模式上是保守的， 空间分布上是广泛的。若以巴马小型猪构建异种器官移植供体模型， 从遗传上将GGTAl基因敲除仍是最为有效的途径。 关键词：广西巴马小型猪0【．1，3半乳糖转移酶定量PCR免疫组织 化学a．Gal抗原表位 Ⅱ CLONINGOF GENE PIGANDSTUDIES FRoMGUANGⅪBA^僵A．MINI ON BIOLoGICAL ITSEXPRESSIONAND FUNCTIoNSIN ⅥVo ABSTRACT whichisalsonamedGGTAlis 0c-1，3一galactosyltransferasegene gene in tissuesof can widelyexpressedmany thereactionwhichadd tothe or catalyze a仅(1,3)galglycolipid 0【-Galdisaccharide glycoproteinN-acetyllactosamineterminal，producing Callbind the antibodies，caus