鸡肌肉生长相关因的表达与肌苷酸关键酶基因网络调控的构建.pdfVIP

鸡肌肉生长相关基因的表达与肌苷酸关键酶基因 网络调控的构建 煅嬲 研究生：栾德琴 导师：陈国宏教授 常国斌副教授 中文摘要 本文选取中国地方鸡种如皋黄鸡和外来鸡种隐性白羽鸡种作为研究对象，利用Agilent 表达谱芯片技术，分别对不同生长阶段的如皋黄鸡和隐性自羽鸡肌肉组织中相关基因转录 特性进行研究，着重分析了2、12周龄两鸡种肌肉组织的差异表达基因，并结合GO分析 进行相关差异基因的生物功能分类，探讨不同鸡种肌肉组织中相关基因表达谱的差异及其 联系与规律，以期了解不同鸡种肌肉组织的生长发育差异，为进一步探明影响鸡肌肉生长 发育的分子机制提供基础。 肌苷酸(Inosine 谢过程十分复杂，肌苷酸关键酶基因包括：磷酸焦磷酸酰胺转移酶(PPAT)，磷酸核糖氨 皋黄鸡基因芯片数据的基础上，运用Perl语言和皮尔森系数方程求解相关基因间线性关系， 构建了影响IMP合成途径中关键酶基因网络调控图，以期探明肌肉组织中IMP合成途径 中关键酶之间的相互作用机理，主要研究结果如下： 1、同一鸡种不同生长阶段差异表达基因的比较 (1)利用基因芯片技术，分析了不同生长阶段下(2．12周龄)如皋黄鸡和隐性白羽 鸡肌肉组织基因的表达情况，获得了13379个基因的差异表达动态图谱。在如皋黄鸡中， 龄时有1 个基因下调表达；10周龄时有136个基因上调表达，118个基因下调表达；12周龄时有 14个基因下调表达。4周龄、12周龄时上调表达基因数量少于下调 94个基因上调表达，1 表达基因的数量，而6周龄、8周龄、10周龄时上调表达基因数量明显多于下调表达基因 的数量；在隐性白羽鸡中，与2周龄相比(尸0．001)，6周龄时有72个基因上调表达， 44个基因上调表达，34个基因下调表达。3个生长阶段，上调表达的基因数量均多于下调 表达的基因数量。 (2)将表达趋势一致的基因归为一类，所有基因可分为12类，相关系数大都集中在 第6类与第5、10类，第8类与第12类相关系数均是1，可得到：生长发育过程中，隐性 白羽鸡表达量发生变化的基因之间的相关系数普遍高于如皋黄鸡。 2、不同时期(2周龄、12周龄)生长相关差异基因的表达 (1)应用表达谱芯片，对如皋黄鸡和隐性白羽鸡不同时期肌肉组织抽提及纯化的 cRNA进行芯片杂交，并对基因表达谱进行分析，如皋黄鸡在不同生长时期(2周龄和12周 条，表达下调114条；隐性白羽鸡在不同生长时期(2周龄和12周龄相比)共筛选出差异表 分类，两鸡种筛选的基因主要涉及生长发育、分子代谢、免疫应答、生物合成、细胞通信 以及蛋白质合成与分解等相关基因，同时经荧光定量PCR技术与蛋白质组技术验证，表达 谱芯片结果可靠。在差异基因中包括一些未知的新基因，但具体的功能以及在鸡生长发育、 能量代谢等的过程所起到的作用需进一步验证。 (2)在差异基因中，如皋黄鸡中共筛选出6条与生长发育相关差异基因，隐性白羽 鸡共筛选出1条差异基因。仅．烯醇化酶基因(NM205120)均参与如皋黄鸡和隐性白羽鸡 生长发育过程，该基因在如皋黄鸡和隐性白羽鸡中表达模式存在差异，其在如皋黄鸡中4 周龄时表达量最低，2周龄和12周龄表达量并无变化；而在隐性白羽鸡中从2周龄到12 周龄表达持续下降，推测Q．烯醇化酶基因可能是影响鸡早期生长性状的候选功能基因：如 持平缓；胰岛素样生长因子1(IGFl)基因低度表达，表达水平持续下降。 3、肌苷酸相关基因网络调控图的构建 肌苷酸相关基因的网络图，结合如皋黄鸡芯片数据构建肌苷酸相关基因网络调控图，运用 Cytoseape和GO将肌苷酸关键酶相关基因的网络调控图进行了功能分类。 (1)通过相关系数模型分析肌苷酸相关基因之间的关联程度，相关系数在0．75以上 ㈣；相关系数在0．90以上时，肌苷酸相关基因包括：AMPD， 可得到：AMPD与GARS．AIRS．GART复合酶基因相关性最高，PPAT次之。 (2)对如皋黄鸡肌苷酸8个关键酶基因表达情况的分析：在如皋黄鸡肌苷酸含量的 的相关系数最高，表明8个关键酶之间存在正相关和负相关。 对肌苷酸调控可能呈现