实验二抗菌药物残留检测试剂盒要点.pptVIP

实验二 抗菌药物残留检测 实验目的 掌握微生物法筛选抗菌药物残留的原理 熟悉抗菌药物残留检测试剂盒检测动物可食组织中抗菌药物残留的方法 一、动物组织中抗菌药物残留快速拭子检测法（FAST） 实验原理 FAST检测试剂盒利用扩散法原理，取无菌拭子插入动物可食组织中，将浸透组织液的拭子放置在已接种检测菌的琼脂平板上，组织中的抗菌药物不断向拭子周围区域扩散，若含量高于最高残留限量（MRL），则抑制扩散区域检测菌的生长，形成透明的抑菌圈，则判定为抗菌药物残留阳性；若低于MRL，则无抑菌圈形成，判定为阴性。 实验试剂和材料 抗菌药物残留快速检测试剂盒（FAST）：FAST平板（Mueller-Hinton培养基），FAST巨大芽孢悬液，无菌棉拭子，记号笔，镊子，塑料直尺。 操作步骤 1、样品处理 将组织样品置瓷盘中，用无菌手术刀切一深约2cm、长约5～7cm的切口， 将无菌棉拭子2支，从切口插入组织中，并使棉拭子头充分接触组织30min。 操作步骤 2、接种检测菌 从冰箱中取出菌悬液，平衡至室温，振摇，使芽孢混合均匀。取无菌棉拭子浸入芽孢悬液中，待完全浸透后取出均匀涂布平板，每涂布一次，将平板顺时针旋转90o，转动4次。 操作步骤 3、放置新霉素纸片 取新霉素纸片置于距平皿边缘12～13mm处的培养基表面，轻压，使纸片与培养基完全接触。 注意：新霉素纸片放置好后，不要挪动其位置，若新霉素纸片的位置不合适，应重新取新的培养基进行涂拭。 操作步骤 4、放置拭子 取浸透组织液的棉拭子剪去拭子杆（剩10-15mm长），将拭子头放置在已涂拭菌悬液的培养基表面，呈兔耳状，轻压拭子杆以固定。 操作步骤 5、培养 将制备好的平板置44～45℃培养箱中，并用烧杯放一定量的水，以防培养基干燥，培养6～12h，不超过12h。 操作步骤 6、结果观察 仔细观察培养基表面细菌生长情况，若有细菌生长，检查新霉素纸片周围的培养基区域，若纸片周围有透明清晰的抑菌圈，且在直径20～26mm，则表明试剂盒有效。若抑菌圈的直径小于20mm，表明实验操作存在问题，应重新进行实验。 若纸片周围无抑菌圈，表明试剂盒材料存在问题或操作不当。 结果判定 二、牛奶抗生素残留检测 实验原理 在牛奶中抗菌药物总残留检测试剂盒中，检测瓶里的培养基含有嗜热脂肪芽孢杆菌孢子、营养物质和pH指示剂。 若牛奶中不含抗菌药或抗菌药浓度低于其在牛奶中的最高残留限量（MRL）时，芽孢杆菌生长，产酸，使培养基的颜色由紫色变为黄色。若牛奶中抗菌药浓度高于MRL，芽孢杆菌的生长受到抑制，培养基的颜色不变，为紫色或浅紫色。 实验材料 牛奶抗生素残留检测试剂盒 本品能检出牛奶中青霉素类、头孢菌素类，氨基苷类、四环素类、大环内脂类、磺胺类和林可胺类的残留。 移液器 水浴锅（65±1 ℃）或恒温设备 实验方法 将微孔板条架在微孔板架上，剥除铝箔。往每孔中加入待检测牛奶样品50μl，另在2个孔中加入无抗奶作为阴性对照。 用胶粘薄膜封闭加样的微孔，装入自封袋内，将其置于已预热至65℃的水浴锅或恒温设备中培养约2.5h。 当阴性对照样品变为黄色时，取出微孔板架，从侧面观察培养基的颜色。 结果判定 培养基颜色变为黄色，表示该孔样品无抗菌药残留或抗菌药浓度低于试剂盒的检测限，为阴性。 培养基颜色变为紫色，表示该孔样品中抗拒要残留超标，为阳性。 若培养基的三分之二处为紫色，则为检测限。 思考题 除了本实验中使用的两种微生物筛选方法检测抗菌药残留以外，还有哪些筛选方法，举一个例子说明其原理和操作步骤。 * * 程古月 王 旭 顺时针旋转90o 重新实验 进行确证实验 动物产品上市 新霉素纸片抑菌圈直径20mm 新霉素纸片抑菌圈直径在20～26mm 新霉素纸片抑菌圈直径在20～26mm 棉拭子处有细菌生长 棉拭子周围有清晰的抑菌圈 棉拭子处有细菌生长 无法判断 阳性结果 阴性结果 阴性结果 阳性结果 适用于养殖场、屠宰场、食品加工厂和残留监控机构等对猪肌肉、肝脏、肾脏和鸡肌肉、肝脏组织中抗菌药物（青霉素类、大环内酯类、四环素类、氨基苷类、氟喹诺酮类）多残留的快速筛选。 两个班共6组，每组3块FAST平板，4个班共准备36块平板。 动物组织中抗菌药物残留快速检测法（FAST）动物组织中抗菌药物残留快速拭子检测法（FAST）是一种用于检测动物组织中抗菌药物残留的简单、快速、准确度高的方法，使用该方法能减少动物产品滞留时间，减少实验室检测的费用。【原 理】本法是一种检测动物组织中是否有抗菌药物的微生物学方法。它是基于动物组织