实验四血球凝集和交叉配血实验要点.pptVIP

实验四 血球凝集反应和交叉配血实验 指导老师：程 燕 实验目的 1、掌握凝集反应和交叉配血实验的原理 2、掌握玻片凝集试验的操作方法，了解其特点和用途 3、学习玻片凝集试验结果的观察方法 实验原理 凝集反应： 颗粒性抗原(细菌、细胞等)与其特异性抗体[直接凝集] 或是可溶性抗原(亦可用抗体)吸附于与免疫无关的载体形成致敏颗粒(免疫微球)与相应的抗体(或抗原)[间接凝集] 在有适量电解质存在下，形成肉眼可见的凝集小块。 注：颗粒性抗原称为凝集原，特异性抗体称为凝集素 凝集反应的特点 颗粒性抗原 致敏颗粒 （可溶性抗原或抗体与载体颗粒结合） 电解质的存在 肉眼可见的凝集现象 凝集反应的类型 直接凝集试验 玻片凝集试验：ABO血型 试管凝集试验：外斐试验，肥达试验 间接凝集试验 正向间接凝集试验 反向间接凝集试验 间接凝集抑制试验 协同凝集试验 间接血凝试验 胶乳凝集试验 明胶凝集试验 实验原理 直接凝集反应： 是颗粒性抗原又称凝集原与相应抗体直接结合所呈现的凝集现象，如红细胞和细菌凝集试验。主要有玻片法、试管法。 玻片法为定性试验，方法简便快速，常用已知抗体检测未知抗原，应用于菌种鉴定，分型及人红细胞ABO血型测定等； 试管法通常为半定量试验，常用已知抗原检测待检血清中有无相应抗体及其相对含量，以帮助临床诊断和分析病情。常有肥达试验，外-斐试验，交叉配血试验等 * 血型抗原 K D C C K B A D 存在于红细胞表面 化学结构： 蛋白质 蛋白质上的糖类抗原 糖蛋白或脂类（糖脂） * ABO 血型 RBC 上的抗原 血清 中的抗体 基因型 O H Anti-A,B O/O A A Anti-B A/A or A/O B B Anti-A B/B or B/O AB AB None A/B ABO血型系统 * ABO以外重要的血型系统及其抗体 2005年，29个红细胞血型系统274个抗原 * 除ABO外与输血有关的最重要的血型系统之一 最重要的五种抗原 C、c、D、E、e 根据D抗原是否存在，一般将Rh系统定义为 Rh阳性：D抗原阳性 Rh阴性：D抗原阴性 （熊猫血型：AB型、 Rh阴性） Rh血型系统 ABO血型的鉴定方法。原理 将标准抗A和抗B血型抗体分别与待测红细胞混合。如果抗原与抗体相对应，则引起红细胞凝集，反之则不凝集，据其凝集现象可判断血型。 结果判读：1、如混合液由均匀红色混浊状逐渐变为透明，并出现大小不等的红色凝集块者，即为红细胞凝集； 2、如混合液仍呈均匀混浊状，则为不凝集。 注：肉眼观察难于判定是否凝集，可在显微镜下用低倍镜观察予以确认。 交叉配血试验 1.交叉配血实验 在输血过程中，要先分别将供血者的RBC与受血者的血清及供血者的血清与受血者的RBC进行的配合试验，以免发生溶血。 2.交叉配血实验的意义 （1）检验血型鉴定是否有误。 （2）检验血清中是否有不规则抗体。 3.交叉配血的方法 供血者的红细胞 受血者血清 受血者的红细胞 供血者血清 （主侧） （次侧） 均不凝集：配血相合 主侧凝集：绝对不可以有凝集或溶血现象 主侧不凝，次侧凝集：供血者血清加受血者红细胞在允许范围内，可以有凝集现象，但不可以有溶血。只在应激情况下少量缓慢，或使用洗涤RBC。 实验器材 实验动物：豚鼠、兔 实验试剂：血液抗凝剂 （1:500u肝素钠注射液） 实验器材：注射器、 一次性离心管 普通吸管、尖吸管、1ml刻度吸管 血球凝集板 实验步骤 1、分别制备兔血清、兔红细胞、豚鼠血清、豚鼠红细胞 2、分别制备5％兔红细胞悬液、 5％豚鼠红细胞悬液 3、交叉配血与玻片凝集观察 取血清0.1ml 放于玻片上，取5％红细胞生理盐水悬液0.1ml ，加于血清中混匀并涂成直径约1cm的圆形，立即记时3 分钟。观察出现凝集的时间和凝集块的大小。 4、加样方法 兔1红细胞 兔2红细胞 豚鼠1红细胞 豚鼠2红细胞 兔1血清 ◆ ◆ ◆ 兔2血清 ◆ ◆ ◆ 豚鼠1血清 ◆ ◆ ◆ 豚鼠2血清 ◆ ◆ ◆ 实验作业 1、什么叫直接凝集反应，什么叫间接凝集反应？它们之间有何异同？ 2、交叉配血的结果填入下表。 兔1红细胞 兔2红细胞 豚鼠1红细胞 豚鼠2红细胞 兔1血清 兔2血清 豚鼠1血清 豚鼠2血清 一共发现有23种血型系，超过500种抗原。 一共发现有23种血型系，超过500种抗原。