C57BL_6和A_J两品系小鼠脾脏消减cDNA文库的构建及差异基因分析.pdfVIP

中国农业科学 2012,45(7):1406-1417 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2012.07.020 C57BL/6 和A/J 两品系小鼠脾脏消减cDNA 文库的构建 及差异基因分析 1 1 1 1 1 2 谢正露 , 沈学怀 , 刘 琳 , 殷复建 , 马海田 , 范红结 1 2 （南京农业大学动物医学院/农业部动物生理生化重点开放实验室，南京210095 ； 南京农业大学动物医学院/农业部动物疫病诊断与免疫重点开放 实验室，江苏南京210095 ） 摘要：【目的】检测健康C57BL/6 和A/J 小鼠常规免疫指标，构建脾脏消减cDNA 文库并筛选差异表达基因， 以探讨两品系小鼠对猪链球菌抗病性差异的分子机制。【方法】利用ELISA 法检测血清常规免疫指标，抑制性消减 杂交（suppression subtraction hybridization，SSH）技术构建8 周龄小鼠脾脏差异表达基因的cDNA 文库。【结 果】试验结果表明，A/J 品系小鼠血清中IgA 水平明显高于C57BL/6 品系小鼠（P＜0.05），而血清IgG 和IFN 水 平在两品系小鼠间均无显著差异。对筛选的149 个阳性克隆进行测序，去除冗余的cDNA 序列载体并聚类拼接后获 得56 条差异表达序列标签（ESTs）。利用Genebank 的BLAST 分析核酸和蛋白质同源性比较，26 个不同的基因或 ESTs 具有高度的同源性，2 条ESTs 未找到同源序列。【结论】筛选到很多EST 与信号转导、细胞凋亡及免疫等重 要功能基因高度同源，为研究猪链球菌的致病机理和防治提供了实验依据。 关键词：C57BL/6 小鼠；A/J 小鼠；抑制性消减杂交；差异表达基因；消减cDNA 文库 Construction of Subtractive Hybridization cDNA Library to Screen Differentially Expressed Genes from the Spleen of C57BL/6 and A/J Mouse and Their Functional Analysis 1 1 1 1 1 2 XIE Zheng-lu , SHEN Xue-huai , LIU Lin , YIN Fu-jian , MA Hai-tian , FAN Hong-jie 1 ( Key Laboratory of Animal Physiology and Biochemistry of the Ministry of Agriculture/College of Veterinary Medicine, Nanjing 2 Agricultural University, Nanjing 210095 ；Key Laboratory of Animal Disease Diagnostic and Immunology of the Ministry of Agriculture/College of Veterinary Medicine, Nanjing Agricultural U