CaM对小鼠胎儿成纤维细胞Hsp70表达的影响.pdfVIP

中国农业科学 2011,44(7): 1495-1501 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2011.07.024 CaM 对小鼠胎儿成纤维细胞Hsp70 表达的影响 张 霞，曹荣峰，丛 霞，李金波，孙 琪，高善颂，田文儒 （青岛农业大学动物科技学院，山东青岛266109 ） 摘要：【目的】证实小鼠胎儿成纤维细胞中钙调蛋白（calmodulin，CaM）基因参与热应激诱导型热休克蛋白 70 （Hsp70）的基因表达并明确其作用条件。【方法】取12.5 d 孕鼠胚胎制备成纤维细胞（MEF），上述细胞随机 分为对照组和热应激组：对照组在37℃条件下培养，热应激组包括Ⅰ组（39℃、0.5 h），Ⅱ组（39℃、1 h），Ⅲ 组（39℃、1.5 h），Ⅳ组（41℃、0.5 h），Ⅴ组（41℃、1 h），Ⅵ组（41℃、1.5 h）；每组3 个重复。将选择的 -1 热应激组和对照组细胞分别加入不同浓度（25、50 及100 mmol·L ）钙调蛋白拮抗剂W7，运用RT-PCR 检测Hsp70、 CaM mRNA 表达量。【结果】39℃和41℃热应激组Hsp70 mRNA 表达量显著高于常温对照组（P＜0.05）；39℃应激1 h 的Hsp70 mRNA 表达量极显著高于其它各组（P＜0.01）；39℃应激0.5 h 和 1 h CaM mRNA 表达量极显著高于其 它各组 （P＜0.01）；41℃热应激组的 CaM mRNA 表达量与常温对照组比较差异不显著（P＞0.05）。在培养液中加 -1 100 mmol·L W7、分别于37℃和39℃处理1 h 后，其成纤维细胞的Hsp70 mRNA 表达量极显著低于相应对照组（P ＜0.01）。【结论】中度热应激条件下，Hsp70 和CaM 基因表达量呈正相关，且39℃应激 1 h 可以显著诱导Hsp70 和CaM 基因表达；CaM 通过某种途径参与了Hsp70 基因表达。 关键词：小鼠胎儿成纤维细胞；热应激；Hsp70；CaM；mRNA Effect of CaM on Expression of Inducible Hsp70 in MEF ZHANG Xia, CAO Rong-feng, CONG Xia, LI Jin-bo, SUN Qi, GAO Shan-song, TIAN Wen-ru （College of Animal Science and Veterinary Medicine, Qingdao Agricultural University, Qingdao 266109, Shandong) Abstract: 【Objective 】The objectives of this study were to reveal whether or not the calmodulin (CaM) gene participates in HSP70 gene expression in the mouse fetal fibroblasts and to definite their participating conditions. 【Method 】 The 12.5-day mouse embryo of pregnancy was taken to culture its fibroblasts (MEF). The fibroblasts were divided into control group and heat shock group randomly. The heat shock group was further divided into groups of Ⅰ(39℃for 0.5 h), Ⅱ(39℃for 1 h), Ⅲ(39℃for 1.5 h