CRISPR_Cas9系统在植物基因组定点编辑中的研究进展.pdfVIP

中国农业科学 2015,48(9):1669-1677 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2015.09.01 CRISPR/Cas9系统在植物基因组定点编辑中的研究进展 解莉楠，宋凤艳，张 旸 （东北林业大学生命科学学院，哈尔滨 150040 ） 摘要：当外源 DNA 通过转基因技术导入植物细胞后，会以同源重组或非同源重组两种不同的方式整合到 基因组中，进而获得相应的目标性状。外源 DNA 与受体细胞序列相同或相近的位点发生重新组合，从而整合 到受体细胞的染色体上称之为同源重组；当发生了 DNA 双链断裂的细胞为了避免 DNA 或染色体断裂而造成 DNA 降解或对生命力的影响，而强行将 2 个 DNA 断端彼此连接在一起时则为非同源重组。发生非同源重组的 细胞其基因组常出现核苷酸片段的插入和/或缺失以及其他突变等多种情况，使得研究者无法得到精确控制 的突变结果；而发生同源重组的细胞基因组序列通常不变，通过加入同源重组的供体 DNA，可以实现对基因 组的精确修饰和改造。由于在植物中产生自发同源重组的概率很低，对植物基因组进行精确修饰和改造非常 困难，位点特异性核酸酶的出现和应用，大大提升了同源重组的效率，使基因组编辑变得更加高效和精确， 从而使得对包括植物在内的任何物种进行基因组编辑都将成为可能。锌指核酸酶（ZFN）和 TALE 核酸酶 （TALENs）是能够使 DNA 的靶位点产生 DNA 双链断裂进而实现基因组定点编辑的常用系统，但在具体应用中 发现这两种系统存在着许多缺陷和不足，如脱靶效应、与基因组进行特异结合与染色体位置及邻近序列有关 等，另外技术难度大、构建组装时间长也限制了其应用。CRISPR/Cas 系统广泛存在于细菌及古生菌中, 是 机体长期进化形成的 RNA 指导的降解入侵病毒或噬菌体 DNA 的适应性免疫系统。Ⅱ型 CRISPR/Cas 系统经过 密码子优化等改造后已成为继锌指核酸酶ZFNs和TALENs 后的新型高效定点编辑的新技术，具有突变效率高、 制作简单、易操作及成本低的特点。目前，该技术成功应用于人类细胞、斑马鱼、小鼠以及细菌的基因组精 确编辑，编辑的类型包括基因的定点插入、小片段的缺失、多个位点同时突变、基因定点的 indel 突变等。 目前，CRISPR/Cas 系统在植物中的应用还比较有限，但该技术为植物基因工程的发展呈现了美好的前景。 文中首先简要介绍了 CRISPR/Cas 系统的组成和基本原理，进而详细综述了该技术在植物内源基因和外源基 因定点编辑中的应用，主要列举了自 CRISPR/Cas 系统改造成功以来利用该系统对单子叶和双子叶植物进行 基因组定点编辑的案例，最后对基因组编辑技术在农业和植物基因工程上的应用进行了展望，希望能够为开 展该领域研究的科研工作者提供参考。 关键词：CRISPR/Cas系统；基因组编辑；植物基因工程 Progress in Research of CRISPR/Cas9 System in Genome Targeted Editing in Plants XIE Li-nan, SONG Feng-yan, ZHANG Yang (College of Life Science, Northeast Forestry University, Harbin 150040) Abstract: When exogenous DNA was imported into plant cell by transgenic technology, DNA fragment will integrate into the genome by homologous recombination or nonhomologous recombination. In addition, the plants seedling will achieve corr