冰鲜鸡肉中致病菌三重PCR检测方法的建立.pdfVIP

中国农业科学 2010,43(17):3608-3615 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2010.17.015 冰鲜鸡肉中致病菌三重PCR检测方法的建立 王虎虎，徐幸莲 （南京农业大学食品科学与技术学院/ 肉品加工与质量控制教育部重点实验室，南京210095 ） 摘要：【目的】建立在鸡肉生产一线具有较强操作性，并可同时检测沙门氏菌、单增李斯特菌、大肠杆菌O157 的三重 PCR 方法。【方法】利用该 3 种致病菌的特异性基因 invA、HlyA、rfbE 设计 3 对引物，在确定方法特异性 和抗干扰能力的基础上，用优化后的反应体系对反应灵敏度进行测定，模拟并检测在鸡肉中常见腐败菌和鸡肉基 质对检测方法的干扰影响作用下，在前增菌程序的辅助下该方法的实际样品检测灵敏度。【结果】该方法特异性和 抗干扰能力强，3种致病菌测序结果的同源性分别达到100%、99%和99%，反应体系的最佳退火温度为51℃，灵敏 度试验中3种致病菌同时检出的检测线达到103 1 CFU/mL，单重的灵敏度达到10 CFU/g，模拟实际样品检测中，经 过 20 h 的前增菌后，三者同时检出的灵敏度达到 101 0 CFU/g，单重 PCR 的灵敏度达到 10 CFU/g；对 60 份屠宰线 上的鸡胴体样品和 32 份超市鸡肉样品中沙门氏菌、单增李斯特菌、大肠杆菌 O157 的检出率分别为 20%、3.3%、 21.7%（屠宰线样品）和25%、21.9%、6.25%（超市样品）。【结论】成功建立了可同时检出鸡肉中沙门氏菌、单增 李斯特菌和大肠杆菌O157的三重PCR方法，可为生产一线的致病菌检测提供参考。 关键词：冰鲜鸡肉；三重PCR；致病菌；检测 Detection of Pathogenic Microorganisms in Fresh Chicken Meat by Multiplex PCR WANG Hu-hu, XU Xing-lian (Key Laboratory of Meat Processing and Quality Control, Ministry of Education/College of Food Science and Technology, Nanjing Agricultural University, Nanjing 210095) Abstract: 【Objective 】 The objective of this study is to develop a feasible multiplex PCR protocol used in chicken processing plant, which can simultaneously detect of Salmonella, L. monocytogene and E. coli O157 in fresh chicken meat. 【Method 】 Three pairs of primers were designed to identify invA gene, HlyA gene and rfbE gene for Salmonella, L. monocytogen