巴西橡胶树橡胶粒子蛋白质的16-BAC_SDS-PAGE双向电泳及质谱分析.pdfVIP

中国农业科学 2012,45(11):2328-2338 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2012.11.023 巴西橡胶树橡胶粒子蛋白质的16-BAC/SDS 双向电泳及质谱分析 代龙军，项秋兰，黎 瑜，聂智毅，康桂娟，段翠芳，曾日中 （中国热带农业科学院橡胶研究所/农业部橡胶树生物学与遗传资源利用重点实验室/省部共建国家重点实验室培育基地，海南儋州 571737 ） 摘要：【目的】分析巴西橡胶树（Hevea Brasiliensis M üll.Arg.）橡胶粒子的蛋白质构成，探索未知的橡 胶粒子蛋白质。【方法】采用16-BAC/SDS PAGE 双向电泳分离橡胶粒子蛋白质，采用MALDI/TOF-TOF 质谱技术进行 蛋白质鉴定；此外，利用磺基异硫氰酸苯酯（SPITC）化学辅助质谱测序法进行肽段的从头测序，获得未知蛋白质 肽段的氨基酸序列。通过搜索橡胶树胶乳转录组测序获得的EST 数据库，获取已知部分氨基酸序列蛋白质的全序 列，或通过部分肽段获取为未知蛋白质编码的EST 序列。【结果】获得了橡胶粒子蛋白质的16-BAC/SDS双向 电泳图谱，鉴定了17 个橡胶粒子蛋白质；获得 1 个小橡胶粒子蛋白（small rubber particle protein，SRPP） 亚家族成员SRPP(gi的完整氨基酸序列以及1 个橡胶延伸因子（rubber elongation factor，REF）亚 家族新成员(hbREF2)的C 端87 个氨基酸残基序列，此蛋白质的氨基酸序列与已知的REF(gi具有高度 的相似性。【结论】采用16-BAC/SDS双向电泳有效地分离了橡胶粒子蛋白质，展现了橡胶粒子蛋白质的相对 含量，研究结果表明构成橡胶粒子的主要蛋白质组分是REF 和SRPP 亚家族蛋白质。橡胶粒子的蛋白质组分的全面 鉴定，将有助于揭示橡胶粒子的生物学功能。 关键词：巴西橡胶树；橡胶粒子；蛋白质；16-BAC/SDS双向电泳；质谱分析 Rubber Particle Protein Analysis of Hevea brasiliensis by Two Dimensional 16-BAC/SDSand Mass Spectrometry DAI Long-jun, XIANG Qiu -lan, LI Yu, NIE Zhi-yi, KANG Gui-juan, DUAN Cui -fang, ZENG Ri-zhong (Rubber Research Institute, Chinese Academy of Tropical Agricultural Sciences (CATAS)/Key Laboratory of Biology and Genetic Resources of Rubber Tree, Ministry of Agriculture/State Key Laboratory Incubation Base, Danzhou 571737, Hainan) Abstract : 【Objective 】 The objective of the study is to investigate the protein composition and to identify the unknown proteins of the rubber particles in the latex of a rubber tree (Hevea brasiliensis Müll. Arg.). 【Method 】The rubber particle proteins were separated using two dimensional 16-BAC/SDS. The protein spots were cut from the 2-DE gel, subjec