大豆孢囊线虫果胶酸裂解酶基因Hg-pel-5的克隆与分析.pdfVIP

中国农业科学 2012,45(5):854-866 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2012.05.005 大豆孢囊线虫果胶酸裂解酶基因Hg-pel-5 的克隆与分析 1,2 2 2 2 1 彭 焕 ，彭德良 ，黄文坤 ，贺文婷 ，胡先奇 1 2 （云南农业大学农业生物多样性应用技术国家工程研究中心，昆明 650201； 中国农业科学院植物保护研究所植物病虫害生物学 国家重点实验室，北京 100193） 摘要：【目的】克隆和分析与大豆孢囊线虫寄生密切相关的果胶酸裂解酶新基因，为研究大豆孢囊线虫寄生 和致病的分子机理提供依据，并为探讨大豆孢囊线虫的防控新途径提供理论基础。【方法】通过 EST 分析结合 RACE-PCR 扩增方法，从大豆孢囊线虫中克隆出1 个果胶酸裂解酶新基因；通过原位杂交和半定量PCR 的方法确定 基因的表达部位和分析不同发育阶段的基因表达；采用Southern 杂交方法分析基因的拷贝数。【结果】 从大豆孢 囊线虫中克隆出1 个全长为957 个碱基编码227 个氨基酸残基的新果胶酸裂解酶基因Hg -pel -5 （GenBank 登录号 HQ123259）。Hg -pel -5 基因组由2 个外显子和1 个内含子组成。预测蛋白含有20 个氨基酸残基的信号肽和4 段细 菌结构的果胶酸裂解酶第三家族的保守位点。原位杂交确定Hg -pel-5 在大豆孢囊线虫亚腹食道腺中表达。半定量 RT-PCR 结果表明Hg -pel-5 在寄生前和寄生过程早期的2 龄幼虫大量表达。Southern 杂交结果显示Hg -pel-5 存在 于大豆孢囊线虫基因组中并以多拷贝形式存在。【结论】对大豆孢囊线虫中 1 个新的果胶酸裂解酶基因Hg -pel-5 进行克隆和分析，表明该基因在大豆孢囊线虫早期寄生过程中发挥重要作用。 关键词：大豆孢囊线虫；果胶酸裂解酶；基因克隆；原位杂交；Southern 杂交 Molecular Cloning and Analysis of a Novel Pectate Lyase Gene Hg-pel-5 from Soybean Cyst Nematode 1, 2 2 2 2 1 PENG Huan , PENG De-liang , HUANG Wen-kun , HE Wen-ting , HU Xian-qi 1 ( The National Engineering Research Center of Agribiodiversity Applied Technologies, Yunnan Agricultural University, Kunming 650201; 2State Key Laboratory for Biology of Plant Diseases and Insect Pests, Institute of Plant Protection, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing 100193 ) Abstract: 【Objective 】The objective of this study is to cl