稻曲病菌分生孢子高产突变体A2588的T-DNA 插入位点侧翼基因分析.pdfVIP

中国农业科学 2013,46(24):5132-5141 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2013.24.007 稻曲病菌分生孢子高产突变体A2588 的T-DNA 插入位点侧翼基因分析 于俊杰，聂亚锋，俞咪娜，尹小乐，胡建坤，黄 磊，陈志谊, 刘永锋 （江苏省农业科学院植物保护研究所，南京210014 ） 摘要： 【目的】克隆稻曲病菌（Ustilaginoidea virens ）分生孢子高产突变菌株A2588 的T-DNA 插入突变 基因，解析该基因在稻曲病菌分生孢子形成中的功能，为进一步揭示稻曲病菌的分生孢子形成机制提供理论基础。 【方法】测定A2588 的产分生孢子能力、孢子萌发率、菌丝直线生长能力和热敏感性等生物学特性，利用 hiTAIL-PCR、RACE 和半定量PCR 等方法克隆T-DNA 插入突变基因，并结合生物信息学方法分析T-DNA 插入导致分 生孢子产量提高的分子机理。【结果】与稻曲病菌野生型菌株70-22 相比，突变菌株A2588 在PS 培养液中产生数 量为10 倍以上的分生孢子，在MM 培养液中产生数量约20 倍的分生孢子，其在PS 培养液中培养的菌球较为致密； 在PSA 和MM 固体培养基上A2588 产孢周期较短，孢子萌发率较低，虽然菌丝生长速度无明显差异，但热处理后菌 丝不能恢复正常生长速率。hiTAIL-PCR 和RACE 法克隆了A2588 中T-DNA 侧翼基因，并利用RT-PCR 检测侧翼基因 表达水平，结果表明T-DNA 侧翼基因spo76 表达水平下降，进一步分析发现T-DNA 可能插入至spo76 的启动子区 域，从而破坏了该基因启动子的部分功能。【结论】稻曲病菌突变菌株 A2588 中，T-DNA 插入导致 spo76 启动子 功能部分缺失，spo76 表达水平下降，可能使A2588 产孢周期缩短，并产生更多分生孢子。 关键词：稻曲病菌；分生孢子；ATMT 转化；spo76 Characterization of T-DNA Insertion Flanking Genes of Enhanced-Conidiation Ustilaginoidea virens Mutant A2588 YU Jun-jie, NIE Ya -feng, YU Mi-na, YIN Xiao-le, HU Jian-kun, HUANG Lei, CHEN Zhi-yi, LIU Yong-feng (Institute of Plant Protection, Jiangsu Academy of Agricultural Sciences, Nanjing 210014) Abstract: 【Objective 】The objective of this study is to clone the mutated gene, which causes enhanced conidiation of the T-DNA insertional mutant A2588, and to shed light on the conidiation mechanism in Ustilaginoidea virens. 【Method 】The sporulation, conidial germination, mycelial growth rate and heat tolerance of the mutant A2588 were determined, and wild-type strain 70-22 was employed as the control. hiTAIL-PCR and RACE were used to identify the insertional T