东北林蛙皮肤抗菌肽dybowskin-1ST的表达、纯化及抑菌活性分析.pdfVIP

中国农业科学 2011,44(15):3246-3251 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2011.15.020 东北林蛙皮肤抗菌肽dybowskin-1ST 的表达、 纯化及抑菌活性分析 1 1 2 1 1 郭 娜 , 肖向红 , 徐义刚 , 柴龙会 , 张晶钰 1 2 （东北林业大学野生动物资源学院/ 国家林业局野生动物保护学重点开放性实验室，哈尔滨 150040； 黑龙江出入境检验检疫局检验检疫技术中心， 哈尔滨 150001） 摘要：【目的】利用毕赤酵母菌真核表达系统重组表达东北林蛙皮肤抗菌肽dybowskin-1ST，分析评价 dybowskin-1ST 的抑菌活性。【方法】采用TRIzol 法提取蛙皮总RNA，经RT-PCR 扩增获得抗菌肽dybowskin-1ST 基因，将目的基因克隆到毕赤酵母菌分泌型表达质粒pPIC9K 中，得到重组质粒pPIC9K-1ST。经电转化将pPIC9K-1ST 转入到毕赤酵母菌GS115 中，获得高效表达dybowskin-1ST 的重组菌株。以甲醇诱导重组菌株，上清液经SDS 检测表明有目的蛋白dybowskin-1ST 分泌表达。目的蛋白经Ni-agarose 色谱柱分离纯化后，对大肠埃希氏菌、肺 炎克雷伯氏杆菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、肠炎沙门氏菌和蜡状芽孢杆菌进行抑菌活性分析。【结果】成功构 建了东北林蛙皮肤抗菌肽dybowskin-1ST 的毕赤酵母真核表达系统，且dybowskin-1ST 对革兰氏阳性菌和革兰氏 阴性菌均有良好的抑菌效果。【结论】东北林蛙皮肤抗菌肽dybowskin-1ST 具有良好的广谱抗菌活性和潜在的研发 价值。 关键词：东北林蛙；抗菌肽；毕赤酵母；抑菌活性 Expression, Purification and Antibacterial Activity Analysis of Rana dybowskii Antimicrobial Peptide Dybowskin-1ST 1 1 2 1 1 GUO Na , XIAO Xiang-hong , XU Yi-gang , CHAI Long-hui , ZHANG Jing-yu 1 ( College of Wildlife Resources, Northeast Forestry University/Key Laboratory of Wildlife Conservation, China State Forestry Administration, Harbin 150040; 2 Technical Centre of Heilongjiang Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau, Harbin 150001) Abstract: 【Objective 】 The aim of this study is to express Rana dybowskii antimicrobial peptide dybowskin-1ST via Pichia p astoris system and to analyze its antibiotic activity. 【