内蒙古白绒山羊VEGF164基因毛囊特异性表达载体的构建及胎儿成纤维细胞的稳定转染.pdfVIP

中国农业科学 2011,44(22):4756-4762 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2011.22.025 内蒙古白绒山羊VEGF164 基因毛囊特异性表达载体的 构建及胎儿成纤维细胞的稳定转染 鲍文蕾，李 彬，侯 鑫，刘俊娥，郭旭东，王志钢，刘东军 （内蒙古大学生命科学学院/哺乳动物生殖生物学与生物技术教育部重点实验室，呼和浩特 010021 ） 摘要：【目的】构建绒山羊血管内皮生长因子164 （vascular endothelial growth factor 164，VEGF164） 基因的毛囊特异表达载体并稳定转染胎儿成纤维细胞，筛选获得稳定表达红色荧光蛋白和毛囊特异表达VEGF164 并可用于核移植的转基因细胞克隆。【方法】以pCDsRed2 载体为基本骨架将VEGF164 基因亚克隆到KAP6-1 启动子 下游，接续连接红色荧光蛋白表达元件，构建VEGF164 基因毛囊特异表达载体pCDsRed2-KV （6.3 kb）。外源表达 载体以lipofectamineTM2000 介导转染胎儿成纤维细胞，G418 筛选获得稳定转染的细胞克隆。PCR鉴定外源基因在 细胞基因组中的整合。【结果】在构建的表达载体pCDsRed2-KV中，VEGF164 基因被正确连接在毛囊特异性启动子 KAP6-1 下游，基因下游按顺序连接CMV启动子和红色荧光蛋白基因；外源KAP6-1 启动子和VEGF164 基因整合到细 胞基因组中。【结论】成功构建稳定表达红色荧光蛋白和毛囊特异表达VEGF164 的真核表达载体，稳定转染绒山羊 胎儿成纤维细胞，为下一步通过克隆技术获得转VEGF164 基因绒山羊提供了条件。 关键词：内蒙古白绒山羊; VEGF; 毛囊特异性表达载体; 稳定转染 Construction of a Hair-Follicle-Cell-Specific Expression Vector of Goat VEGF164 Gene and Its Transfection into Caprine Fetal Fibroblasts Cells Stably BAO Wen-lei, LI Bin, HOU Xin, LIU Jun-e, GUO Xu-dong, WANG Zhi-gang, LIU Dong-jun (College of Life Sciences, Inner Mongolia University/Key Laboratory of Mammal Reproductive Biology and Biotechnology of the Ministry of Education, Hohhot 010021) Abstract: 【Objective 】 The present study aims at constructing a eukaryotic expression vector pCDsRed2-KV of goat VEGF164 (vascular endothelial cell growth factor) gene and then to transfer it into Inner Mongolia Cashmere Goat (Capra hircus) fetal fibroblast (GFb) cells to obtain a transgenic cell clones, which stably expresses red fluorescence and expresses VEGF164 in hair follicle cells specifically. The transgenic cell clones can be used for nuclear transplantation. 【Method 】 pCDsRe