内蒙古白绒山羊蛋白激酶B_AKT基因的克隆及表达模式分析.pdfVIP

中国农业科学 2011,44(13):2787-2795 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2011.13.017 内蒙古白绒山羊蛋白激酶B/AKT 基因的克隆及表达模式分析 杨娇馥，史偈君，梁 燕，郑 旭，张 涛，秦 毅，王志钢，刘东军 （内蒙古大学生命科学学院/哺乳动物生殖生物学与生物技术教育部重点实验室，呼和浩特 010021 ） 摘要：【目的】克隆内蒙古白绒山羊AKT 基因 cDNA 并分析其基本表达模式。【方法】RT-PCR 克隆 AKT 基因 cDNA。通过在线软件BLAST 进行核酸序列分析，用SMART 与Psite 进行氨基酸序列分析。半定量RT-PCR 检测AKT 基因在绒山羊组织中的表达特异性。Western blotting 检测绒山羊胎儿成纤维细胞中 AKT 表达。【结果】克隆到 的内蒙古白绒山羊AKT 基因 cDNA 片段长 1 443 bp，包含了编码480 个氨基酸残基的全长ORF，氨基酸序列与绵 羊（NM_001161857.1）同源性为97%。SMART 分析表明，ORF 编码的蛋白包含了可与3-磷酸肌醇结合的PH 结构域 及具有丝氨酸/苏氨酸激酶催化活性的S_TKc 结构域。Psite 分析表明，含有 1 个cAMP-/cGMP-依赖性蛋白激酶磷 酸化位点、6 个蛋白激酶C 磷酸化位点、10 个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点、2 个蛋白激酶ATP 结合区信号和 1 个丝 氨酸/苏氨酸蛋白激酶活性区域。PSORT 程序预测其定位于细胞质中。AKT 基因mRNA 丰度在睾丸、脑和肾中较高， 在脾、肝、肺及乳腺组织中相对低。绒山羊胎儿成纤维细胞中抑制 mTOR 活性，AKT 表达量降低。【结论】内蒙古 白绒山羊AKT 基因cDNA 全长ORF 的核苷酸序列与绵羊的AKT 基因具有很高的同源性，AKT 基因在脾、睾丸、脑、 肝、肺、乳腺及肾组织中均有表达，其AKT 的表达受mTOR 信号通路的调控。 关键词：内蒙古白绒山羊；AKT；基因克隆；表达模式分析 Cloning and Expression Pattern of Protein Kinase B/AKT Gene in Inner Mongolia Cashmere Goat YANG Jiao-fu, SHI Jie-jun, LIANG Yan, ZHENG Xu, ZHANG Tao, QIN Yi, WANG Zhi-gang, LIU Dong-jun (College of Life Science, Inner Mongolia University/Key Laboratory of Mammal Reproductive Biology and Biotechnology, Ministry of Education, Huhhot 010021) Abstract: 【Objective 】The present study aims at cloning the CDS fragment of AKT gene cDNA in Inner Mongolia Cashmere Goat and analyzing its tissue-specific expression. 【Method 】AKT gene cDNA was cloned by RT-PCR. The nucleotide sequence was analyzed by BLAST and amino acid sequence was analyzed by online softwares SMART and Psite. The tissue-specific expression pattern of AKT was analyzed by semi-quantitative RT-PCR. The expression of AKT in goat fibroblasts was detected by Western blo