家蚕空泡型ATP酶（V-ATPase）基因的基本信息及表达特征.pdfVIP

中国农业科学 2014,47(8): 1611-1621 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2014.08.017 家蚕空泡型ATP 酶（V-ATPase）基因的 基本信息及表达特征 王 鑫，李 懿，陈全梅，衣启营，谢 康，吴 用，赵 萍 （西南大学家蚕基因组生物学国家重点实验室，重庆400716 ） 摘要：【目的】鉴定家蚕（Bombyx mori ）中的空泡型ATP 酶（vacuolar-type ATPase, V-ATP 酶）A、B 亚基 的编码基因，并调查其在家蚕幼虫5 龄第3 天不同组织和上蔟时期丝腺不同区段的表达特征。【方法】利用生物信 息学的方法鉴定家蚕的V-ATP 酶A、B 亚基的编码基因并在线预测V-ATP 酶两个亚基所具有的结构域，采用软件将 其分别与其他物种中V-ATP 酶A、B 亚基的氨基酸序列进行同源序列比对和进化树的构建，通过荧光定量PCR 技术 分析家蚕V-ATP 酶A、B 亚基的编码基因在5 龄第3 天家蚕各组织的表达情况。进一步利用向家蚕幼虫上蔟时期的 气孔注射pH 值指示剂溴酚蓝，对丝腺进行染色，通过颜色变化对丝腺不同区段的pH 值进行调查。最后，采用荧 光定量PCR 对家蚕上蔟时期丝腺不同区段V-ATP 酶A、B 亚基编码基因的表达情况进行分析。【结果】获得了家蚕 V-ATP 酶A、B 亚基的编码基因BGIBMGA008295 (GenBank登录号NM_001098359.1)和BGIBMGA002241 (GenBank登录 号NM_001098358.1)。结构域预测发现这两个亚基均具有3 个非常保守的结构域，分别为位于N 端的β筒结构域、 序列中部的核苷酸结合结构域和 C 端结构域。将这两个基因编码的 V-ATP 酶A、B 亚基的氨基酸序列与其他物种 V-ATP 酶A、B 亚基的氨基酸序列进行同源性比对和进化树的构建，同源比对结果发现不同物种中V-ATP 酶A、B 亚基的氨基酸相似度为90%，保守结构域间相似度高达95%以上，说明不同物种间V-ATP 酶A、B 亚基高度保守。 进化树显示家蚕V-ATP 酶A、B 亚基与同属于鳞翅目的其他昆虫的V-ATP 酶A、B 亚基亲缘关系较近。5 龄第 3 天 家蚕各组织中V-ATP 酶A、B 亚基编码基因的荧光定量PCR 结果显示，这两个基因主要在中肠、脂肪体、生殖腺和 丝腺中表达。使用溴酚蓝染色的方法分析上蔟期丝腺不同区段的pH 情况，结果显示家蚕后部丝腺、中部丝腺后区 和中区为中性或碱性环境，中部丝腺前区pH 急剧下降到酸性环境，前部丝腺也为酸性环境。进一步对V-ATP 酶A、 B 亚基编码基因在上蔟期丝腺不同区段进行表达情况分析，发现V-ATP 酶A、B 亚基基因在前部丝腺和中部丝腺前 区高量表达，推测V-ATP 酶可能与这两个区域低pH 环境的产生和维持相关。【结论】明确了V-ATP 酶在家蚕各组 织的表达情况，V-ATP 酶可能与中部丝腺前区和前部丝腺腺腔的酸化相关，这为进一步研究 V-ATP 酶的生理功能 提供了理论依据。 关键词：家蚕；V-ATP 酶；系统进化；荧光定量PCR；丝腺；组织特异性表达 Bioinformational Analysis and Expression Pattern of V-ATPase in Silkworm (Bombyx mori) WANG Xin, LI Yi, CHEN Quan-mei, YI Qi-ying, XIE Kang, WU Yong, ZHAO Ping (State Key Laboratory of Silkworm Genome Biology, Southwest University, Chongqing 400716) Abstract : 【Objective 】 The objective of this study is to identify the vacuolar-type ATP