兼抗虫、除草剂、干旱转基因玉米的获得和鉴定.pdfVIP

中国农业科学 2015,48(2):215-228 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2015.02.02 兼抗虫、除草剂、干旱转基因玉米的获得和鉴定 1 1 2 1 1 孙 越 ，刘秀霞 ，李丽莉 ，官赟赟 ，张举仁 1 2 （山东大学生命科学学院，济南 250100 ； 山东省农业科学院植物保护研究所，济南 250100 ） 摘要：【目的】培育抗玉米螟、抗草甘膦、抗旱的转基因复合性状玉米种质。【方法】通过农杆菌介导的玉米 茎尖遗传转化法，把重组到同一植物表达载体的 cry1AcM、epsps、GAT 和 ZmPIS 转入玉米骨干自交系 9801 和齐 319（Q319），获得转基因植株。通过逐代除草剂筛选、分子检测和抗虫性鉴定，从大量转基因株系中优选出 6 个 优良玉米株系。在此基础上，以非转基因自交系9801、Q319为对照，在严格控制条件下对6个转基因株系进行抗 虫、抗除草剂和抗旱性检测。由于不同生长时期植株对玉米螟危害的敏感程度有差异，在抗虫性检测试验中，对 不同生长阶段的转基因玉米的抗虫性，分别进行了田间和室内玉米螟接种试验，并以灌浆期玉米的籽粒和苞叶饲 喂玉米螟幼虫检测其杀虫性。在草甘膦抗性鉴定试验中，对 6 叶期田间玉米植株喷洒大田除草用量的草甘膦溶液 评估其应用价值；采用 3 倍应用剂量的草甘膦溶液喷施 3 叶期玉米植株测试其草甘膦耐受力。在抗旱性鉴定试验 中，对10叶期玉米植株进行干旱胁迫处理，观测转基因植株的表型变化并测定光合作用和叶绿素荧光等参数。【结 果】选择出6 个遗传稳定的兼抗亚洲玉米螟、抗草甘膦和抗旱性提高的转基因玉米株系，其中株系L1—L3来自自 交系9801，Q1—Q3来自自交系Q319。通过 RT-PCR检测4 个转基因的转录强度，证明它们在转基因植株中有效表 达；利用 Western blot 方法检测 cry1Ac 蛋白的表达水平，确定其在玉米植株中稳定表达。植株抗虫性鉴定结果 显示这 6 个株系在玉米营养生长期和灌浆期的抗虫能力均显著高于未转基因自交系。在草甘膦抗性测试中，转基 因植株表现出明显高于未转基因自交系的草甘膦抗性。在干旱控水期间，转基因植株能维持较强的光合能力和光 系统Ⅱ活性，对干旱胁迫的抗性显著高于对照植株。【结论】将cry1AcM、epsps、GAT、ZmPIS 一同转入玉米，赋 予了植株抗玉米螟、抗除草剂草甘膦特性，提高了植株的抗旱性，达到生产中应用标准。培育出具有优良复合性 状的转基因玉米新材料。 关键词：抗玉米螟；抗草甘膦；抗旱；复合性状；转基因玉米 Production of Transgenic Maize Germplasm with Multi-Traits of Insect-resistance, Glyphosate-Resistance and Drought-Tolerance 1 1 2 1 1 SUN Yue , LIU Xiu-xia , LI Li-li , GUAN Yun-yun , ZHANG Ju-ren 1 2 ( School of Life Science, Shandong University, Jinan 250100; Institute of Plant Protection, Shandong Academy of Agricultural