菊花翻译起始因子4E基因的克隆、 表达分析及其互作蛋白的筛选.pdfVIP

中国农业科学 2013,46(9):1881-1891 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2013.09.016 菊花翻译起始因子4E 基因的克隆、 表达分析及其互作蛋白的筛选 楼望淮，安 娟，宋爱萍，陈素梅，蒋甲福，陈发棣，房伟民，管志勇 （南京农业大学园艺学院，南京210095 ） 摘要：【目的】为了研究翻译起始因子4E 在菊花中的表达特性及功能，克隆菊花翻译起始因子4E （CmeIF4E） 基因，分析其表达特性并初步筛选得到菊花CmeIF4E 的互作蛋白。【方法】根据已报道植物的eIF4E 序列设计引 物，采用RT-PCR 和RACE 技术克隆菊花eIF4E 基因，荧光定量PCR 及亚细胞定位分析菊花CmeIF4E 的表达特性， 并用酵母双杂交系统筛选其互作蛋白。【结果】克隆获得菊花eIF4E 基因全长914 bp，其开放阅读框（ORF）654 bp， 编码1 条包含218 个氨基酸残基的多肽，将该基因名为CmeIF4E，GenBank 登录号为JQ904591。氨基酸序列比对 和系统进化分析表明，菊花CmeIF4E 与已报道的莴苣的同源基因亲缘关系最近，该结果与植物分类学相符。荧光 定量PCR 分析结果显示，CmeIF4E 基因在切花菊‘神马’各个器官中均有表达，幼嫩的根中表达量最高，其次是 叶片，而茎中表达量最低。亚细胞定位分析发现，CmeIF4E 在细胞的核、质、膜上都有表达。筛选得到菊花CmeIF4E 互作蛋白，其中包括蛋白翻译和翻译后修饰、光合作用、抗逆和防御等相关蛋白。【结论】CmeIF4E 在菊花组织 中为组成型表达，亚细胞定位显示其在细胞核、细胞质、细胞膜上都有表达。候选蛋白分析验证了CmeIF4E 在翻 译起始中的作用，还推测其可能与光合系统、植物的抗逆防御相关，结果为进一步研究该蛋白在菊花中的作用提 供了重要依据。 关键词：菊花；eIF4E；病毒；表达分析；亚细胞定位；酵母双杂交系统 Cloning and Expression Analysis of Eukaryotic Translation Initiation Factor 4E Gene and Screening of the Interactive Protein from Chrysanthemum ×morifolium LOU Wang-huai, AN Juan, SONG Ai-ping, CHEN Su-mei, JIANG Jia-fu, CHEN Fa-di, FANG Wei-min, GUAN Zhi-yong (College of Horticulture, Nanjing Agricultural University, Nanjing 210095) Abstract: 【Objective 】In order to study the expression patterns and function of translation initiation factor 4E in the Chrysanthemum, the eukaryotic translation initiation factor 4E gene was cloned from Chrysanthemum×morifolium ‘Jinba’ and its expression was analyzed, and the proteins interacting with the CmeIF4E protein were screened subsequently. 【Method 】CmeIF4E gene was cloned from Chrysanthemum by RT-PCR and RACE, the primers were d