橘小实蝇蜕皮激素合成通路基因鉴定分析及饥饿对幼虫发育的影响.pdfVIP

中国农业科学 2015,48(22):4469-4482 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2015.22.008 橘小实蝇蜕皮激素合成通路基因鉴定分析及 饥饿对幼虫发育的影响 1, 2 1 1, 3 1, 3 1 2 1 丛 林 ，蒋玄赵 ，杨文佳 ，许抗抗 ，豆 威 ，冉 春 ，王进军 1 2 3 （西南大学植物保护学院，重庆 400715 ； 西南大学柑桔研究所，重庆 400712 ； 贵阳学院生物与环境工程学院，贵阳 550005 ） 摘要：【目的】蜕皮激素（ecdysone）是昆虫体内一种重要的激素，参与调控昆虫的生长发育，并且能对环 境胁迫进行响应。研究旨在明确橘小实蝇（Bactrocera dorsalis Hendel）蜕皮激素合成通路基因（ecdysone synthesis pathway gene）的分布和特定条件下的表达特性，为进一步开展橘小实蝇变态发育与抗逆胁迫机制的 研究提供理论支持。【方法】采用 RT-PCR 和 RACE 技术克隆蜕皮激素合成通路基因BdCyp302a1、BdCyp315a1 和 BdCyp314a1，利用实时定量PCR（qPCR）技术检测该合成通路基因BdNvd、BdCyp306a1、BdCyp302a1、BdCyp315a1 和 BdCyp314a1 在幼虫不同发育阶段（幼虫1—8日龄）、不同组织（前胸腺复合体、脂肪体、中肠、马氏管、表皮 和气管）和饥饿条件下的表达模式，明确饥饿对幼虫发育的影响。【结果】克隆获得了3个蜕皮激素合成通路基因 序列的开放阅读框，分别为 BdCyp302a1 （GenBank登录号：JQ027284）、BdCyp315a1 （GenBank登录号：KC515377） 和 BdCyp314a1 （GenBank 登录号：JQ229645），且上述序列均具备 P450 典型结构域：Helix-C/I/K、PERF 基序、 血红蛋白结合位点以及脯氨酸/甘氨酸富集区，其氨基酸序列较为保守。qPCR 检测结果显示蜕皮激素合成通路基 因BdNvd、BdCyp306a1 和 BdCyp314a1 幼虫末龄阶段表达量显著升高，其最高表达量分别是最低点的7.33、10.89 和7.82倍，但在幼虫前4 d表达量差异不显著。而 BdCyp302a1 和 BdCyp315a1 在整个幼虫阶段表达量保持相对稳 定。对不同组织的研究发现，蜕皮激素合成通路基因在所选的 6 个组织中均有表达，其中 BdNvd、BdCyp306a1 和 BdCyp315a1 在幼虫前胸腺表达量最高，在其他组织中表达量差异不显著；BdCyp302a1 在各组织中的表达量由高到 低为脂肪体前胸腺表皮/马氏管气管/中肠，该基因在脂肪体的表达量是中肠的30 倍；BdCyp314a1 在中肠、马 氏管和脂肪体内的表达量依次降低，但均极显著高于其他3个组织。橘小实蝇幼虫在饥饿处理12 h后即出现化蛹 现象，其化蛹比例随饥饿时间延长而上升。对蛹宽和蛹长的测量中发现，饥饿导致蛹个体显著缩小，但未影响其 存活率。同时，饥饿导致蜕皮激素合成通路基因 BdNvd、BdCyp302a1 和 BdCyp314a1 表达量在饥饿处理6 h后出现 显著上调，并在处理48 h后出现显著下调；但饥饿处理并未影响BdCyp315a1 的表达水平。【结论】蜕皮激素合成 通路基因在橘小实蝇幼虫组织的表达具有差异性，并参与介导幼虫-蛹的变态过程和对营养胁迫的响应。 关键词：橘小实蝇；蜕皮激素合成通路；饥饿胁迫；幼虫发育；基因表达 Identification of Ecdysone Synthesis Pathway Genes and An