利用cDNA-AFLP分析内生解淀粉芽胞杆菌 Fy11诱导辣椒差异表达基因.pdfVIP

中国农业科学 2013,46(12):2449-2458 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2013.12.006 利用cDNA-AFLP 分析内生解淀粉芽胞杆菌 Fy11 诱导辣椒差异表达基因 1 1 2 1 1 杨瑞先 ，范晓静 ，邱思鑫 ，蔡学清 ，胡方平 1 2 （福建农林大学植物保护学院，福州 350002 ； 福建省农业科学院作物研究所，福州 350002 ） 摘要：【目的】分析内生解淀粉芽胞杆菌（Bacillus amyloliquefaciens ）Fy11 诱导辣椒 （Capsicum annuum ） 幼苗差异表达基因，了解辣椒与内生芽胞杆菌互作的分子机制。【方法】利用cDNA-AFLP 技术，采用256 对引物， 分析辣椒幼苗接种内生解淀粉芽胞杆菌Fy11 后5 个时间点的基因表达谱；利用qRT-PCR 分析差异基因表达模式， 验证cDNA-AFLP 表达谱。【结果】256 对引物共产生 18 620 个转录本（TDF），筛选获得353 条差异表达条带，占 扩增条带总数的 1.89%。经克隆、测序分析，最终获得 257 个差异 TDF，聚类分析得到 229 个独立基因 （EST， unigenes），其中144个基因上调表达，85 个基因下调表达。经Blastx 比对和功能分类分析，其中65 条EST（28.38%） 未找到同源性匹配，8 条（3.49%）与未知功能蛋白同源性较高。其余156 条EST 主要涉及基础代谢基因（10.92%）； 与能量和抗病与防御类相关基因，各占8.73%；信号转导基因占7.42%；转运子或转座子基因占6.99%；与细胞结 构相关基因占6.55%；参与转录调控基因占5.68%；细胞生长类基因占3.93%；参与蛋白质运输和储存有8 个基因， 占3.49%；蛋白质合成类基因占2.18%；次生代谢类和胞间运输类基因，其数量相对较少，各占1.75%。选取与抗 病防御、转录调控及信号转导类等相关的10 个差异基因，qRT-PCR 分析结果显示其表达模式符合cDNA-AFLP 表达 谱。【结论】内生细菌与植物互作的分子机制涉及植物多方面生理生化反应，包括抗病防御、转录调控、蛋白质代 谢、信号转导、以及非生物胁迫等多种途径相关基因的协同控制。 关键词：辣椒；内生解淀粉芽胞杆菌；互作；基因表达；cDNA-AFLP；qRT-PCR cDNA-AFLP Analysis of Differential Gene Expression in Pepper Inoculated with Endophytic Bacillus amyloliquefaciens Fy11 1 1 2 1 1 YANG Rui-xian , FAN Xiao-jing , QIU Si-xin , CAI Xue-qing , HU Fang-ping 1 2 ( College of Plant Protection, Fujian Agriculture and Forestry University, Fuzhou 350002 ; Institute of Crop Sciences, Fujian