利用cDNA-AFLP技术分离与小麦耐盐性相关的 cDNA片段及基因的可行性研究.pdfVIP

中国农业科学 2006,39(9):1736-1742 Scientia Agricultura Sinica 利用cDNA-AFLP技术获得小麦耐盐性相关基因 TaVHA-C 1,2 1 1 1 秘彩莉 ，张学勇 ，温小杰 ，刘 旭 1 （中国农业科学院作物科学研究所/农业部作物品种资源与生物技术重点实验室，北京 100081； 2 河北师范大学生命科学学院，石家庄 050016 ） 摘要：【目的】利用cDNA-AFLP技术对耐盐性受主效基因控制的小麦品系98-160盐胁迫前后基因表达的变 化进行分析。【方法】对112 个克隆的cDNA 差异表达片段进行了Blast-x分析。【结果】约有65.2%的片段与已 知基因有较高的同源性，从中筛选出18个与小麦耐盐性密切相关的片段，主要包括转录因子、与离子转运有关 的蛋白、信号传导相关蛋白、胁迫相关蛋白以及与蛋白-蛋白相互作用有关的蛋白。以 94 号片段为基础，通过 电子延伸和RT-PCR，克隆了小麦液泡膜ATPaseＣ亚基（TaVHA-C）的全长cDNA，Northern结果表明，在胁迫的 早期（0～2 h）TaVHA-C 基因的表达基本不变，随着胁迫时间的延长（6～12 h），TaVHA-C 基因的表达逐渐减 弱，以后（24～72 h）又逐渐增强。低温对 TaVHA-C 基因的表达有明显的抑制作用。【结论】利用 cDNA-AFLP 技术分离差异表达片段进行相关基因的研究是可行的。 关键词：小麦；耐盐性；cDNA-AFLP；TaVHA-C Isolation of TaVHA-C, A Gene in Wheat Related to Salt-Tolerance via cDNA-AFLP 1,2 1 1 1 BEI Cai-li , ZHANG Xue-yong , WEN Xiao-jie , LIU Xu 1 ( Crop Science Institute, Chinese Academy of Agricultural Sciences / Key Laboratory of Crop Germplasm Resources and Biotechnology, Ministry of Agriculture, Beijing 100081; 2 Life Science Academy of Hebei Normal University, Shijiazhuang 050016 ) Abstract: 【Objective 】 98-160 is a wheat line with excellent salt-tolerance that is controlled by major genes. The expression profiles of 98-160 stressed by salt for different times were studied via cDNA-AFLP. 【Method 】 One hundred and twelve differentially expressing cDNA fragments were obtained, which were sequenced and analyzed by Blast-x. 【Result 】 One hundred and twelve fragments were cloned and sequenced. The Blastx analysis showed that 62.5% of the