两个苹果乙烯反应因子MdAP2D4与MdAP2D19的序列分析及原核表达.pdfVIP

中国农业科学 2013,46(17):3635-3642 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2013.17.012 两个苹果乙烯反应因子MdAP2D4 与MdAP2D19 的 序列分析及原核表达 1,2 1 1 2 3 2 1 田 义 ，陈可钦 ，安秀红 ，郝红梅 ，刘 志 ，丛佩华 ，郝玉金 1 2 （山东农业大学园艺科学与工程学院/作物生物学国家重点实验室，山东泰安271018 ； 中国农业科学院果树研究所/农业部园艺作物种质资源利用 3 重点实验室，辽宁兴城125100； 辽宁省果树科学研究所，辽宁熊岳115009） 摘要：【目的】克隆苹果中的两个ERF （ethylene responsive factor）转录因子，对其序列与表达进行分析； 并进一步构建原核表达载体，在大肠杆菌中诱导融合蛋白表达，为解析两基因的抗病功能及作用机制奠定基础。 【方法】首先，将抑制性消减杂交筛选到的EST 序列进行BLAST 比对，根据比对获得的MdAP2D4 与MdAP2D19 的 cDNA 序列设计引物进行克隆；然后，利用MEGA4.1 软件将两个ERF 蛋白与拟南芥的AP2 家族蛋白进行聚类分析， 对保守的AP2 功能域的氨基酸序列进行分析；并进一步利用RT-PCR 检测两基因对外源MeJA 的响应；最后，将两 个基因分别连接到原核表达载体PGEX-4T-1 上，利用IPTG 对转化的大肠杆菌BL21 进行诱导。【结果】MdAP2D4 与 MdAP2D19 两个基因均与拟南芥B3 组ERF 亲缘关系最近，在叶片中表达较高，都能被外源的MeJA 诱导表达。SDS 检测结果表明，两个基因的融合蛋白均能够被IPTG 诱导表达。【结论】MdAP2D4 与MdAP2D19 为 B3 组ERF 转录因 子，外源MeJA 能够诱导其表达。 关键词：抑制性消减杂交；茉莉酸甲酯；乙烯反应因子；原核表达；抗病性 Sequence Analysis and Prokaryotic Expression of Two Ethylene Responsive Factors MdAP2D4 and MdAP2D19 1,2 1 1 2 3 2 1 TIAN Yi , CHEN Ke-qin , AN Xiu-hong , HAO Hong-mei , LIU Zhi , CONG Pei-hua , HAO Yu-jin 1 2 ( College of Horticulture Science and Engineering/State Key Laboratory of Crop Biology, Taian 271018, Shandong ; Institute of Pomology, Chinese Academy of Agricultural Sciences/Key Laboratory of Fruit Germpla