辽宁省稻瘟病菌无毒基因型鉴定及分析.pdfVIP

中国农业科学 2014,47(3):462-472 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2014.03.006 辽宁省稻瘟病菌无毒基因型鉴定及分析 1,2 2 2 1 1 1 1 王世维 ，郑文静 ，赵家铭 ，魏松红 ，王 妍 ，赵宝海 ，刘志恒 1 2 （沈阳农业大学植物保护学院，沈阳 110161； 辽宁省农业科学院创新中心，沈阳 110161） 摘要：【目的】鉴定稻瘟病菌（Magnaporthe oryzae ）的无毒基因型，了解无毒基因在不同地区流行菌株中 的分布情况，为品种布局提供参考。【方法】根据已经克隆且与稻瘟病菌致病性相关的6 个无毒基因序列设计引物， 选取辽宁省稻瘟病常发区的26 株稻瘟病菌单孢菌株，提取各菌株DNA 样本作为模板，进行PCR 扩增。通过琼脂糖 凝胶电泳及PCR 产物测序，对6 个无毒基因PCR 产物进行碱基和氨基酸序列的分析比较。对琼脂糖凝胶电泳未出 条带的，设计不同引物进行验证性试验。【结果】在PCR 产物电泳检测中，Avr1-CO39、Avr-pia 和Avr-pii 没有 产物条带，对这 3 个无毒基因设计验证引物，其PCR 产物电泳检测仍没有条带出现，其结果证明辽宁省各水稻主 产区流行稻瘟病菌中多不携带 Avr1-CO39、Avr-pia 和 Avr-pii；对于其他 3 个无毒基因 AvrPiz-t、Avr-pik 和 Avr-pita 则有特异性扩增产物，说明这3 个无毒基因在各稻区稻瘟病菌中以不同突变类型及不同频率出现。其中， 与Pi2、Pi9 和Piz-t 对应的AvrPiz-t，分别在22 个菌株的中被检测到，且有 21 个菌株的序列与其序列一致， 说明该基因遗传相对稳定，也间接证明携带 Pi2、Pi9 和 Piz-t 的水稻品种在辽宁地区的广谱抗性；与基因组序 列不同的16 号菌株，在DNA 序列 192 bp 处发生一个单碱基C 的缺失，从而导致移码突变，且碱基突变导致氨基 酸序列至72 位氨基酸时提前终止，而使该基因编码的蛋白质失去无毒基因的功能。与Pik、Pik-p、Pik-m 和pik-s 对应的Avr-pik，电泳检测结果表明各菌株均有特异性条带出现，经测序验证等位基因序列分为4 种类型（B、D、 F、G ），其中12 个菌株携带可为Pik 或其等位基因Pik-m 和pik-p 所识别的D 类型；9 个菌株携带B 类型，该等 位基因曾被报道，但是否具有无毒基因的功能仍未验证；另有2 个菌株携带F 类型等位基因，该基因为首次发现， 并分别出现在丹东和盘锦地区。其特点在于与D 类型基因间存在143 （A/G ）的碱基差异，氨基酸序列翻译结果显 示其为错义突变，即48 （G/D ）；而其余3 个菌株携带G 类型等位基因，该基因亦属首次发现，且仅出现在抚顺新 宾地区，碱基序列与D 类型存在 168 （G/A ）的差异，导致翻译提前终止，基因功能丧失。对于Avr-pita，26 个 菌株特异性扩增产物一致，但测序检测到5 种等位基因类型，且均与Avr-pita 有差异，碱基序列的变化多导致错 义突变。这5 种等位基因的氨基酸序列之间差异由3 个氨基酸位点的差异所致，分别为83 （D/N ）、192 （Y/C ）和 207（K/R ），3 处突变均在基因结构域范围内，几种等位基因均已见报道。【结论】辽宁稻区流行稻瘟病菌中Avr-pik、 AvrPiz-t 和Avr-pita 分布较为广泛，选育及推广携带相应抗病基因的水稻品种可减轻稻瘟病的危害。 关键词：辽宁省；稻瘟病菌；无毒基因 Identification and Analysis of Magnaporthe oryzae Avirulence Genes in Liaoning Province