吕氏泰勒虫cDNA表达文库的构建及其抗原基因的免疫筛选.pdfVIP

中国农业科学 2009,42(1):331-339 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2009.01.043 吕氏泰勒虫cDNA表达文库的构建及其抗原基因的免疫筛选 李有全，罗建勋，高金亮，关贵全，马米玲，刘志杰，刘军龙，刘爱红，任巧云，党志胜，鲁炳义， 刘光远，白 启，殷 宏 （中国农业科学院兰州兽医研究所/家畜疫病病原生物国家重点实验室/甘肃省动物寄生虫病重点实验室，兰州 730046 ） 摘要：【目的】构建吕氏泰勒虫裂殖子 cDNA 表达文库，并从中筛选抗原候选基因。【方法】从吕氏泰勒虫裂 殖子直接提取和纯化 mRNA，采用 oligo（dT）引物合成双链 cDNA，并在其两端加 EcoRⅠ/HindⅢ定向接头。将所 产生的 cDNA 分子定向克隆到具有 EcoRⅠ/HindⅢ粘性末端的λSCREEN 载体的两臂之间。用 PhageMaker extract 对连接产物进行体外包装以形成完整的噬菌体，并用之转染大肠杆菌 ER1647，从而构建成吕氏泰勒虫的 cDNA 表 达文库。用吕氏泰勒虫阳性血清和兔抗绵羊IgG-AP筛选得到阳性克隆，经测序和Blast软件分析并获得新基因。 6 【结果】成功构建吕氏泰勒虫裂殖子cDNA 表达文库，其初级库容量约为1.0×10 PFU，扩增文库的滴度为8.2× 108 -1 PFU·ml ，文库重组率为100%；通过免疫学筛选、测序和Blast软件分析，共获得30个新基因，其中15个基 因已登录GenBank/NCBI。【结论】为研究泰勒虫疫苗、新型医药和诊断抗原，以及发展可持续性防制羊泰勒虫病 提供基本材料。 关键词：吕氏泰勒虫；cDNA表达文库；构建；免疫筛选 Construction of cDNA Expression Library of Theileria luwenshuni and Immunoscreening of Antigenic Genes LI You-quan, LUO Jian-xun, GAO Jin-liang, GUAN Gui-quan, MA Mi-ling, LIU Zhi-jie, LIU Jun-long, LIU Ai-hong, REN Qiao-yun, DANG Zhi-sheng, LU Bing-yi, LIU Guang-yuan, BAI Qi, YIN Hong (Lanzhou Veterinary Research Institute, Chinese Academy of Agricultural Sciences, State Key Laboratory of Veterinary Etiological Biology, Key Laboratory of Veterinary Parasitology of Gansu Province, Lanzhou 730046) Abstract: 【objective 】 A cDNA expression library of the merozoites of Theileria luwenshuni was successfully constructed and antigenic genes were obtained by immunoscreening from it. 【Method 】 Purified mRNA was isolated from the merozoites of Theileria luwenshuni. A library of oligo (dT) -primed c