小麦品种陕253新型avenin-like的克隆与原核表达分析.pdfVIP

中国农业科学 2010,43(9):1954-1962 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2010.09.024 小麦品种陕253新型 avenin-like 的克隆 与原核表达分析 1 1，2，3 1，2，3 1，2，3 1，2，3 1 1 陈瑞佶 ，高 翔 ，陈其皎 ，董 剑 ，赵万春 ，李艳亮 ，王明霞 ， 李 敏 1，庞红喜 1，2，3，李哲清 1，2，3，刘 俊 1，2，3 1 2 3 （西北农林科技大学农学院，陕西杨凌 712100 ； 陕西省小麦工程技术研究中心，陕西杨凌 712100 ； 陕西省小麦新品种培育工程研究中心， 陕西杨凌 712100 ） 摘要：【目的】克隆小麦品种陕 253 中的新型avenin-like （类燕麦储藏蛋白），并构建该基因的原核表达载 体，在大肠杆菌中诱导表达融合蛋白。【方法】利用PCR 方法从小麦品种陕253中克隆新型avenin-like，将克隆 的 avenin-like 亚克隆至表达载体，经酶切及测序鉴定后，转化宿主菌 Escherichia coli Rosetta-gami B (DE3)， 经IPTG诱导表达融合蛋白，并利用Western blot进行检测。【结果】从小麦品种陕253克隆获得3个新avenin-like， GenBank 登录号分别为 GQ903577、GQ903578 和 GQ903579。序列分析表明，其中 GQ903579 为假基因，利用所构建 的大肠杆菌表达载体，经IPTG诱导，实现了对登录号为GQ903578的基因在原核系统的特异性表达。【结论】新型 avenin-like 的克隆及原核表达的成功，为小麦品质改良提供了研究基础。 关键词：avenin-like；基因克隆；载体构建；融合蛋白；原核表达 Cloning and Prokaryotic Expression of an avenin-like from Wheat Variety Shaan 253 1 1,2,3 1,2,3 1,2,3 1,2,3 1 CHEN Rui-ji , GAO Xiang , CHEN Qi-jiao , DONG Jian , ZHAO Wan-chun , LI Yan-liang , 1 1 1,2,3 1,2,3 1,2,3 WANG Ming-xia , LI Min , PANG Hong-xi , LI Zhe-qing , LIU Jun 1 2 ( Colleg