小麦与条锈菌亲和互作的差减文库构建及初步分析.pdfVIP

中国农业科学 2008,41(5):1267-1273 Scientia Agricultura Sinica 小麦与条锈菌亲和互作的差减文库构建及初步分析 1 1 1 2 1 2 1 1,2 喻修道 ，屈志鹏 ，郭 军 ，于秀梅 ，黄雪玲 ，韩青梅 ，黄丽丽 ，康振生 1 2 （西北农林科技大学植物保护学院，陕西杨凌 712100 ； 西北农林科技大学陕西省农业分子生物学重点实验室，陕西杨凌 712100 ） 摘要：【目的】构建小麦与条锈菌亲和互作的差减文库，分离条锈菌侵染小麦过程中的差异表达基因。【方 法】以小麦品种水源11和条锈菌相应毒性小种CY31号为材料，构建条锈菌侵染阶段的SSH-cDNA文库，挑选250 个阳性克隆测序并进行生物信息学分析。【结果】聚类后得到 149 条非冗余 EST（unigene）。经 Blast X 比对和 功能分类分析，其中50 条unigene（33.6%）未找到同源性匹配，25条（16.8%）与未知功能蛋白同源性较高；其 余 74 条功能已知的 unigene 中，与初级代谢、能量相关的基因分别有 13 条和 10 个，占 8.7%和 6.7%，感病及防 御相关的基因有 6 个约占 4.0%；此外，获得两个与病原菌有较高同源性的基因。随后，进一步利用 RT-PCR 对 6 个基因的表达模式进行了分析。【结论】成功构建了小麦与条锈菌亲和互作的差减文库，分离出一部分与小麦条锈 病发病相关的基因，可用于进一步研究条锈菌侵染过程中特异基因的功能。 关键词：小麦；条锈菌；抑制差减杂交；亲和互作；反转录PCR Construction and Preliminary Analysis of the Compatible SSH cDNA Library Between Puccinia striiformis and Wheat 1 1 1 2 1 2 YU Xiu-dao , QU Zhi-peng , GUO Jun , YU Xiu-mei , HUANG Xue-ling , HAN Qing-mei , HUANG Li-li1, KANG Zhen-sheng1,2 1 2 ( College of Plant Protection, Northwest A F University, Yangling 712100, Shaanxi; Shaanxi Key Laboratory of Molecular Biology for Agriculture, Northwest AF University, Yangling 712100, Shaanxi) Abstract: 【Objective 】This study was conducted to isolate differentially expressed genes during the compatible interactions between Puccinia striiformis and wheat. 【Method 】A SSH-cDNA library was constructed with wheat variety Shuiyuan-11 and a Chinese virulent race CY31 of Puccinia striiformis, 250 positive clones were sele