小麦贮藏蛋白反相高效液相色谱分析体系研究.pdfVIP

中国农业科学 2007,40(5):1002-1009 Scientia Agricultura Sinica 小麦贮藏蛋白反相高效液相色谱分析体系研究 1.2 2 2 2.3 张平平 ，张 勇 ，夏先春 ，何中虎 1 2 （华中农业大学植物科技学院，武汉430007 ； 中国农业科学院作物科学研究所/ 国家小麦改良中心/ 国家农作物基因资源与基因改良重大科学工程， 3 北京100081； 国际玉米小麦改良中心中国办事处，北京100081） 摘要：【目的】反相高效液相色谱（RP-HPLC）是定性和定量分析小麦贮藏蛋白的有效方法，在国外的应用始 于20世纪80 年代初，但在国内一直没有利用，也无开展系统的研究。本研究的目的是填补国内这一研究的空白。 【方法】选用 2个代表性品种中优9507（强筋）和京411（弱筋），系统研究了柱温、洗脱梯度、样品量、提取时 间和进样体积对贮藏蛋白分离效果和量化的影响，并验证了分析重复性。【结果】结果表明，45 mg 面粉样品，使 用50%正丙醇（v/v）和含有50%正丙醇（v/v）、1%二硫苏糖醇（w/v）的弱酸缓冲液（Tris-HCl，pH6.6），分别对 醇溶蛋白和谷蛋白提取 45 min，可以使提取率达到 90%。醇溶蛋白和谷蛋白分别进样 10～15 µl 和 15～20 µl， 可以使实际量化值接近理论量化值。针对我国小麦品种贮藏蛋白组成的特殊性对洗脱梯度进行优化后，提高了高 分子量谷蛋白亚基与低分子量谷蛋白亚基之间的分离度。【结论】配合聚丙烯酰氨凝胶电泳（PAGE）可以对贮藏蛋 白各组分进行准确定性定量分析，为深入研究小麦贮藏蛋白和加工品质的关系提供了工具。 关键词：小麦；贮藏蛋白；高效液相色谱；定性和定量分析 Protocol Establishment of Reversed-Phase High-Performance Liquid Chromatography (RP-HPLC) for Analyzing Wheat Gluten Protein 1,2 2 2 2,3 ZHANG Ping-ping , ZHANG Yong , XIA Xian-chun , HE Zhong-hu 1 2 ( College of Plant Science and Technology, Huazhong Agricultural University, Wuhan 430070; Institute of Crop Science / National Wheat Improvement Center/National Key Facility for Crop Gene Resources and Genetic Improvement, Chinese Academy of Agricultural Sciences , Beijing 100081; 3CIMMYT China Office, Beijing 100081) Abstract: 【Objective 】This study wi