小鼠卵泡膜细胞成熟过程中Dnmts表达变化的研究.pdfVIP

中国农业科学 2011,44(24):5108-5116 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2011.24.017 小鼠卵泡膜细胞成熟过程中Dnmts 表达变化的研究 1 1 2 1 1 1 1 1 刘笑然 , 李冬冬 , 钟友刚 , 史雅然 , 张 超 , 张 松 , 刘 琳 , 高建明 1 2 （北京农学院动物科学技术学院，北京 102206； 中国农业大学动物医学院，北京100193） 摘要：【目的】揭示小鼠卵泡膜细胞成熟过程中DNA 甲基转移酶（Dnmts）表达的变化，并初步探讨其可能的 机制。【方法】对新生昆明白小鼠第3、5 及8 天（days post parturition，dpp3、dpp5 和dpp8）的卵巢进行切 片，经H.E 染色，分别观察原始、初级、次级卵泡膜细胞的形成情况，统计各级卵泡的比例并对卵泡外缘的膜细 胞进行计数；半定量PCR 检测成熟膜细胞特异性表达基因CYP17A1 及Dnmts 转录水平在dpp3、dpp5、dpp8 卵巢中 的变化；免疫组化观察Dnmt1 蛋白在dpp3、dpp5、dpp8 小鼠卵巢中的分布情况。【结果】小鼠dpp3 卵巢中的初 级卵泡外缘存在“梭形细胞”；随出生后时间的推移，原始卵泡比例持续下降（P＜0.01），次级卵泡比例持续升 高 （ P＜0.01），dpp3、dpp5 初级卵泡比例无显著差异（P＞0.05），而dpp8 下降（P＜0.05）；初级卵泡周围“梭 形细胞”数量的平均水平在dpp3 和dpp5 无显著差异（P＞0.05），在dpp8 上升（P＜0.05）；次级卵泡周围“梭形 细胞”数量的平均水平在dpp3 和dpp5 无显著差异（P＞0.05），在dpp8 上升（P＜0.01）。CYP17A1 转录水平在dpp3、 dpp5 极低且无显著差异(P＞0.05)，在dpp8 升高（P＜0.01）；Dnmt1s 转录水平在dpp3、dpp5、dpp8 持续升高 （ P＜0.01）；Dnmt1o 转录水平在dpp5 升高（P＜0.05），在dpp8 下降（P＜0.01）；Dnmt3a 转录水平在dpp5 升高 （ P＜0.01），dpp3 和 dpp8 转录水平无显著差异（P＞0.05）。Dnmt1 免疫组化显示，卵泡颗粒细胞在dpp5、dpp8 卵巢中着色呈阳性，dpp3 则呈阴性；同时，“梭形细胞”在dpp3、dpp5 卵巢中着色呈阴性，dpp8 则呈阳性。【结 论】膜细胞成熟可能导致 Dnmt3a 转录水平下降。Dnmt1s 转录及表达水平在膜细胞成熟前较低，分化成熟后上调 从而在膜细胞增殖过程中维持新建立的甲基化模式。 关键词：DNA 甲基转移酶；卵泡膜细胞；成熟；小鼠 Study on the Variation of Dnmts Expression During Follicular Theca Cells Maturation in Mouse 1 1 2 1 1 LIU Xiao-ran , LI Dong-dong , ZHONG You-gang , SHI Ya-ran , ZHANG Chao , 1 1 1