小麦重要自噬相关基因ATG18的鉴定和表达分析.pdfVIP

中国农业科学 2014,47(9): 1657-1669 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2014.09.001 小麦重要自噬相关基因ATG18 的鉴定和表达分析 孙 鸿，张 微，卫晓静，王华忠 （天津师范大学生命科学学院/天津市动植物抗性重点实验室，天津 300387 ） 摘要：【目的】克隆小麦重要自噬相关基因ATG18，分析其编码产物的序列特征和高级结构，了解其在生物、 非生物胁迫及激素处理条件下的表达模式，阐明其生物学功能。【方法】利用EST 拼接和RT-PCR 方法从白粉菌侵 染的小麦叶片中克隆ATG18 cDNA 序列，利用生物信息学方法进行基因的外显子-内含子结构分析、编码蛋白的结 构域和保守氨基酸预测、高级结构分析和物种间同源蛋白的进化分析。采用实时荧光定量PCR 方法研究基因表达 对白粉菌侵染和外源激素处理的响应模式及对高盐、干旱、低温黑暗和缺氮培养等逆境胁迫处理的响应模式。【结 果】获得了4 个小麦ATG18 家族成员（TaATG18a、TaATG18b、TaATG18c 和TaATG18d ）cDNA。4 个基因高度相似， 均含有1 158 bp 开放阅读框（ORF ），编码385 个氨基酸的蛋白质。4 个基因的编码蛋白在一级结构上均含有典型 的WD-40 结构域、磷脂酰肌醇-3-磷酸（PI3P ）结合基序和保守的ATG2 结合位点氨基酸残基。4 个基因均具有 2 种转录后的可变剪接方式，2 种剪接产物mRNA 分别编码完整的有功能蛋白和N 端截短导致结构域和功能位点缺失 的无功能蛋白。TaATG18a 蛋白在高级结构上折叠成与其他WD-40 蛋白类似的β-推进器样构象，PI3P 结合基序位 于推进器第五叶片的折叠4 和第五、六叶片的连接部分，ATG2 结合位点位于连接第二叶片和第三叶片的loop 上。 TaATG18s 能够被白粉菌侵染诱导表达，但具体的诱导表达模式在抗、感白粉病反应之间存在明显差异。在广谱抗 白粉病基因Pm21 和小种专一性抗白粉病基因Pm3f 介导的抗病反应中，TaATG18s 均呈现接种白粉菌后0—36 h 期 间的2 次诱导表达模式，2 次诱导表达时间与白粉菌侵染进程密切相关。在中感材料扬麦 158 遗传背景上的感病 反应中，TaATG18s 尽管也呈现 2 次诱导表达，但第一次诱导表达持续时间短且强度低于含Pm21 的近等基因系上 抗病反应中的表现，相反第二次诱导表达强度高于抗病反应中的表现。高感材料 Chancellor 遗传背景上的 TaATG18s 响应白粉菌侵染的表达波动较小。外源乙烯或SA 处理对TaATG18s 表达的调控作用在抗、感白粉病材料 上明显不同，在感病材料上表现激活作用，而在抗病材料上表现抑制作用。激素处理对TaATG18s 表达的调控不仅 作用于转录水平，还作用于转录后的 mRNA 剪接环节。高盐、干旱、低温黑暗和缺氮培养等逆境处理也能够上调 TaATG18s 的表达。【结论】推测鉴定的4 个TaATG18s 编码蛋白具有通过结合PI3P 定位于自噬膜表面和通过形成 ATG18-ATG2 复合物参与小麦自噬过程的功能。TaATG18s 及其参与的自噬过程与小麦对白粉菌侵染的免疫反应密切 相关，也与小麦响应非生物逆境胁迫环境相关。抗、感材料TaATG18s 对同种激素信号的不同响应模式可能是导致 抗、感白粉病表型差异的原因之一。 关键词：小麦；细胞自噬；ATG18；白粉病 Identification of Wheat Key Autophagy-Related Factor ATG18 and Profiling of Their Expression Under Biotic and Abiotic Stresses SUN Hong, ZHANG Wei, WEI Xiao-j ing, WANG Hua-zhong (School of Life Sciences, Tianjin Normal University/Tianjin Key Laboratory of Animals and Plant