羊软骨中胶原蛋肽的提取及其抗氧化性研究.pdf

摘 要 本课题研究内蒙古锡林郭勒草原苏尼特羊软骨中的胶原蛋白和胶原蛋白肽的分 离、纯化和提取以及胶原蛋白肽的分子量、氨基酸组成和抗氧化性。研究结果如下： 以羊软骨为试验材料，经脱脂、脱钙、除杂蛋白等前处理过程后，采用乙酸-胃 蛋白酶酶解的方法从羊软骨中提取胶原蛋白,并进一步分离纯化。结果表明，最佳脱 脂剂为氯仿：甲醇：水=1:2:0.8，其脱脂率为55.88%；最佳脱钙试剂为0.5mol/LEDTA， 其脱钙率为 29.16%。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS）电泳结果显示提取的胶 原蛋白与sigma 公司的II 型标准品相一致。紫外光谱分析显示提取胶原的最大吸收 峰为230nm 左右。采用羟脯氨酸标准曲线的方法测定提取物中 II 型胶原蛋白含量为 40.58%。 以提取的II 型胶原蛋白为试验材料，研究三种不同蛋白酶对胶原蛋白肽提取率 的影响；采用最佳蛋白酶水解，对酶解温度、pH 值、时间、酶添加量四个因素进行 分析；利用Design-Expert8.0.5.0 软件设计胶原蛋白肽制备的响应面试验方案，得 到二次多项式回归模型的最优条件：温度65℃，pH11.0，酶添加量1.13%，验证试验 与预测值基本吻合。 采用SepHadex G-50 层析的方法对提取物进行分离纯化。对提取的胶原蛋白多肽 进行氨基酸组成的分析。分析结果表明，提取物中胶原蛋白特有的甘氨酸和脯氨酸含 量非常高，证实提取物为胶原多肽产物。对分离纯化后出现的两个蛋白峰进行分子量 测定。结果表明峰 1 的分子量范围为887.4452-1705.8848Da，峰2 的分子量范围为 315.9514-488.9621Da。以清除羟基自由基、超氧阴离子能力和水解物还原能力为指 标分别测定两个蛋白峰的抗氧化性。结果表明，峰2 （处理组2）的抗氧化性优于峰 1 （处理组1）。 关键词：羊软骨；胶原蛋白；胶原蛋白多肽；提取；抗氧化性 Studies on the Extraction of Collagen Peptide from Sheep Cartilage and Antioxidant Activity of Collagen Peptide Abstract The subject of the paper is to isolate the collagen and collagen peptide from cartilage in sunit Inner Mongolia sheep. The sheep cartilages were collected as raw materials, after preliminary dealing with the periosteum, decalcification from sheep cartilages for removing of impurities. The enzymolysis of pepsin in acid solvent, salting of sodium chloride and dialysis were performed for extracting collagen and identification. The molecular, amino acid composition and antioxidation of the collagen peptide were detected. The results showed below: The best grease remover was three-pHase solution (chloroform: methanol: water=1:2:0.8) and the ratio of degreasing was 55.88%. The best excluding calcium reagent was 0.5mol/L EDTA and the ratio of decalcification was