酶的生物合成法生产资料.ppt

RNA合成过程 RNA链的延伸图解 蛋白质的合成过程 （大肠杆菌） （一）基因调控理论  Jacob and Monod的操纵子学说（operon theory） 调节基因 regulator gene ： 可产生一种组成型调节蛋白 regulatory protein （一种变构蛋白），通过与效应物 effector （包括诱导物和辅阻遏物）的特异结合而发生变构作用，从而改变它与操纵基因的结合力。 调节基因常位于调控区的上游。 乳糖操纵子的负调控 2.末端产物阻遏 由某代谢途径末端产物的过量累积引起的阻遏。 酶合成阻遏的现象： 实验： （1）大肠杆菌生长在无机盐和葡萄糖的培养基上时， 检测到细胞内有色氨酸合成酶的存在； （2）在上述培养基中加入色氨酸，检测发现细胞内色氨酸合成酶的活性降低，直至消失。 （3）表明色氨酸的存在阻止了色氨酸合成酶的合成，体现了菌生长的经济原则:不需要就不合成。 色氨酸操纵子——酶的阻遏 酶的诱导和阻遏操纵子模型 3.分解代谢物阻遏 指细胞内同时有两种分解底物（碳源或氮源）存在时，利用快的那种分解底物会阻遏利用慢的底物的有关酶合成的现象。 分解代谢物的阻遏作用，并非由于快速利用的甲碳源本身直接作用的结果，而是通过甲碳源（或氮源等）在其分解过程中所产生的中间代谢物所引起的阻遏作用。 分解代谢物阻遏现象： 实验：细菌在含有葡萄糖和乳糖的培养基上生长，优先利用葡萄糖。待葡萄糖耗尽后才开始利用乳糖，产生了两个对数生长期中间隔开一个生长延滞期的“二次生长现象” diauxie或biphasic growth）。 乳糖操纵子的正调控——分解代谢物阻遏 第二节 酶发酵动力学 研究内容：研究发酵过程中细胞的生长速率，产物的形成速率以及环境因素对这些速率的影响。即研究生物反应速度的规律。 意义：更加深入地认识和掌握发酵过程，为工业发酵的模拟、优化和控制打下基础。 研究方法：用数学模型定量描述。 营养物浓度（生长限制基质浓度）和生长速率之间的动力学关系：Monod模型 μ:比生长速率（1/h） （specific growth rate）即每单位数量的细菌或物质在单位时间内（h）增加的量 μmax：最大比生长速率（1/h） S：营养物浓度（生长限制基质浓度） 克/L Ks：莫诺德常数或饱和常数或营养物利用常数 克/L，或 mol/L Ks是使μ达到最大比生长率μmax值一半时的营养物浓度（限制基质浓度）。 当一种限制性营养物浓度S大大低于Ks时，μ μmaxS/Ks，即μ很小，此时生长很慢。 当S Ks时，μ 0.5 μmax，随营养物浓度增加，μ相应增加，逐渐趋向μmax，μ成为营养物浓度的重要函数，此时营养物浓度仍是生长的限制因素，在Monod模型上表现为曲线。 当S无限大时，μ?μmax，理论上最大潜力。 当营养物浓度S大大高于Ks时，营养物浓度不再影响微生物生长，即S的变化不再成为生长限制因素，此时，μ接近μmax，在Monod曲线上表现为直线。 在分批培养时，Ks表示微生物对营养物的亲和力，Ks越小，微生物对限制性营养物的亲和力越大，限制性营养物的浓度必须降低到十分低的水平，才能影响微生物的生长，Ks越大，亲和力越小，即使限制性营养物浓度很高，生长率也下降。 一些微生物的μmax和Monod饱和常数 微生物 生长限制基质 μmax Ks E. Coli 葡萄糖 0.85 2.0-4.0 E. Coli 乳糖 20 酿酒酵母 葡萄糖 0.13 25 木霉菌 葡萄糖 0.13 43.2 产脘假丝酵母 氧 0.44 0.03 产脘假丝酵母 甘油 4.5 在影响的诸多因素中，营养条件最为重要 1）营养物种类： 要考虑碳源对酶生物合成的调节作用，如产生诱导作用还是分解代谢物阻遏作用。 2）营养物比例： C/N比不当, 影响菌体对按比例吸收营养物 改变原来合适的pH环境 氮源不足，表现为菌体繁殖慢， 碳源不足，表现为菌体容易衰老 3）营养物浓度：对易被吸收的限制性营养物浓度控制为充足而不过大。 植物、动物、微生物细胞的特性比较 总结：影响酶生物合成模式的主要因素 高：可在细胞停止生长后继 1）mRNA的稳定性 续合成酶 差：随着细胞停止生长而终 止酶的合成 2）培养基中阻遏物的存在 不受阻遏：随着细胞的生长而开始酶的合成。 受阻遏：细胞生长一段时间或平衡期后，酶才开始 合成。 酶生产中最理想的合成模式： 延续合成型：发酵过程中没有生长期和产酶期的明显差别。细胞开始生长就有酶的产生，直至细胞生长进入平衡期后，酶还可以继续生成一段时间。 对于： 同步合成型：提高对应的mRNA的稳定性，如降低发酵 温度 。 滞后合成型：尽量减少甚至解除分解代谢物阻遏