中国弓形虫虫株529bp重复序列的PCR扩增、克隆及分析.pdfVIP

中国农业科学 2007,40(9):2114-2118 Scientia Agricultura Sinica 中国弓形虫虫株529bp重复序列的PCR扩增、克隆及分析 1 2 1 1 1 1 宋慧群 ，张德林 ，廖申权 ，翁亚彪 ，林瑞庆 ，朱兴全 1 2 （华南农业大学兽医学院，广州 510642 ； 中国农业科学院兰州兽医研究所，兰州 730046 ） 摘要：【目的】首次对中国来源于不同宿主、不同地域的 9 个弓形虫虫株(ZS1 人株、PY 猪株、GY 猪株、ZC 猪株、NT猪株、ZS人株、SH 人株、CN猪株、QHO绵羊株)以及国际标准强毒RH株之间在529 bp重复序列的变异 进行研究，从而为进一步的分子诊断和分子遗传学研究以及弓形虫病的防制奠定基础。【方法】抽提基因组DNA后， 用 PCR 方法对 10 个虫株的 529 bp 重复序列进行扩增；扩增产物经纯化后克隆于 pGEM-T Easy 质粒载体，再经菌 落PCR及酶切鉴定阳性克隆，然后对阳性克隆进行测序及序列分析。【结果】10个弓形虫虫株的529 bp重复序列 都不完全相同，它们之间的核苷酸序列变异范围为0.8%～2.9%。变异主要位于第32～55位碱基之间,这些碱基变 异与虫株的宿主来源、地域来源及毒力之间没有相关性。【结论】529 bp 重复序列可作为遗传标记，用于弓形虫 与其它寄生虫的种间鉴定，但不适合用于研究弓形虫的种内遗传变异。 关键词：弓形虫；PCR；529 bp重复序列；序列分析；遗传变异 Amplification, Cloning and Sequence Analysis of a Repetitive 529bp DNA Fragment from Toxoplasma gondii Strains from China 1 2 1 1 1 1 SONG Hui-qun , ZHANG De-lin , LIAO Shen-quan , WENG Ya-biao , LIN Rui-qing , ZHU Xing-quan 1 2 ( College of Veterinary Medicine, South China Agricultural University, Guangzhou 510642；Lanzhou Veterinary Research Institute, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Lanzhou 730046) Abstract: 【Objective 】The objective of the present study was to examine sequence variation in the repetitive 529 bp DNA fragment among 9 T. gondii strains from different hosts and geographical locations in China, and to compare the sequences with that of the RH reference strain. 【Method 】 The 529 bp fragment was amplified by PCR from genomic DNA of the 10 T. gondii strains, and the amplicons were purified, cloned into pGEM-T Eas