枳SPL9和SPL13全长cDNA克隆、亚细胞定位和表达分析.pdfVIP

中国农业科学 2010,43(10):2105-2114 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2010.10.017 枳 SPL9 和 SPL13 全长cDNA克隆、亚细胞定位和表达分析 1 2 1 2 2 1 1 宋长年 ，钱剑林 ，房经贵 ，王化坤 ，邱学林 ，章 镇 ，张晓莹 1 2 （南京农业大学园艺学院，南京 210095 ； 江苏省太湖常绿果树技术推广中心，江苏苏州 215107 ） 摘要：【目的】从枳[Poncirus trifoliata (L.) Raf.]中克隆SBP类[SQUAMOSA (SQUA) promoter-binding-like] 转录因子基因 SPL9 和 SPL13 全长，构建 SPL9 和 SPL13 亚细胞定位表达载体验证其是否具有核定位功能，利用荧 光定量PCR研究其在枳不同组织的表达特性，初步确定 SPL9 和 SPL13 在枳生长发育过程中的作用。【方法】利用 生物信息学结合 RACE 技术以枳花器官的 cDNA 为模板，克隆出 SPL9 和 SPL13 基因全长，分别命名 Pt-SPL9 和 Pt-SPL13，大小分别是1 519 bp 和1 824 bp，在GenBank 的登录号分别是FJ502237和 FJ502238；构建Pt-SPL9 和 Pt-SPL13 亚细胞定位载体35S-GW-FJ502237/FJ502238-GFP，基因枪转化洋葱表皮细胞，暗培养24 h 后激光共 聚焦显微镜下观察；利用SYBR Green I实时定量RT-PCR方法检测 Pt-SPL9 和 Pt-SPL13 在根、茎、叶、花序、花 和果等不同组织中的表达。【结果】生物信息学分析表明，Pt-SPL9 和 Pt-SPL13 的cDNA序列中都有microRNA156 的识别位点，Pt-SPL9与金鱼草、拟南芥和玉米SPL9的同源性分别为48.9%、42.5%和41.7%；Pt-SPL13 与拟南芥 SPL13、水稻的SPL16和玉米的TGA1同源性分别为40.8%、38.1%和35.8%。Pt-SPL9和Pt-SPL13与其它植物的SBP 一样有着高度保守的序列，即 SBP 结构域和一个双向核定位信号 KRXXXRRRK。亚细胞定位结果表明，Pt-SPL9 和 Pt-SPL13均定位于细胞核中。SYBR Green I实时定量RT-PCR结果表明，Pt-SPL9 和 Pt-SPL13 在各个器官均有表 达，但表达量不同，Pt-SPL9 在茎中的表达量最高，在花和叶中的表达量次之，在根、花芽和幼果中的表达量最 低；Pt-SPL13 在幼果中的表达量最高，在茎和花芽中的表达量相当，其次为叶，在花和根中的表达量很低。【结 论】转录因子 Pt-SPL9 和 Pt-SPL13 均具有核定位功能，Pt-SPL9 和 Pt-SPL13 对枳的茎和果实的发育可能有着重 要作用。 关键词：枳；SPL9 和 SPL13；亚细胞定位；荧光定量RT-PCR Cloning, Subcellular Localization and Expression Analysis of SPL9 and SPL13 Genes from Poncirus trifoliata 1 2 1 2 2 1 SONG Chang-nian , QIAN Jian-lin , FANG Jing-gui , WANG H