中国50个甘蓝代表品种EST-SSR指纹图谱的构建.pdfVIP

中国农业科学 2014,47(1): 111-121 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2014.01.012 中国50 个甘蓝代表品种EST-SSR 指纹图谱的构建 王庆彪，张扬勇，庄 木，杨丽梅，刘玉梅，吕红豪，方智远 （中国农业科学院蔬菜花卉研究所，北京100081） 摘要：【目的】研究甘蓝 DNA 指纹鉴定方法,并构建 50 份中国甘蓝代表品种 DNA 指纹数据库，为甘蓝品种特 异性、真实性、纯度鉴定提供参考依据。【方法】首先，利用 6%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳技术和来源不同的甘蓝 材料对已开发的甘蓝EST-SSR 引物进行筛选，获得多态性引物；然后将可用于甘蓝DNA 指纹鉴定的核心引物正义 链5′末端分别标记TAMRA、HEX、 ROX、6-FAM 四种荧光，利用DNA 分析仪检测不同等位变异的扩增片段大小，并 确定每个等位变异的标准品种。利用核心引物扩增结合标准品种的片段大小，构建中国50 个甘蓝代表品种的SSR 指纹数据库。通过人工构建模拟群体对 ‘中甘 21’品种真实性进行鉴定，进而对该指纹鉴定技术进行验证。【结 果】利用 6 份来自中国不同生态条件、植物学性状差异较大的甘蓝品种对978 对EST-SSR 引物进行初步筛选，获 得带型清晰、具有多态性的引物 128 对。进一步根据引物扩增带型清晰、多态性信息指数较高、不同等位变异 的带型易于区分、在染色体上分布均匀原则，筛选出20 对核心引物。该套引物可以检测甘蓝染色体20 个位点的 58 个等位变异，平均每条染色体上被检测位点2.22 个，平均每个位点包含2.9 个等位变异，其中引物BoE607、 BoE723 等位变异数最多为5 个，PIC 值处于0.34—0.76 之间。通过DNA 分析仪检测显示等位变异扩增片段长度范 围143—296 bp。利用 20 对核心引物构建50 份中国甘蓝代表品种DNA 指纹数据库，并阐述了甘蓝SSR-DNA 指纹 鉴定的应用和技术流程。本研究还对来自甘蓝主产区的 31 份 ‘中甘21’品种进行真实性鉴定，结果显示指纹鉴 定与田间鉴结果完全一致。【结论】筛选获得20 对核心引物，用于构建中国50 个甘蓝代表品种DNA 指纹数据库， 通过构建人工模拟群体对‘中甘21’品种的真实性进行鉴定，准确率达100%。 关键词：甘蓝；SSR 标记；指纹图谱；品种鉴定 EST-SSR Fingerprinting of Fifty Cabbage Representative Varieties from China WANG Qing-biao, ZHANG Yang-yong, ZHUANG Mu, YANG Li-mei, LIU Yu-mei, LÜ Hong-hao, FANG Zhi-yuan (Institute of Vegetables and Flowers, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing 100081 ) Abstract : 【Objective 】In this study, the method of cabbage DNA fingerprint was drawn, and fifty cabbage representative varieties from China were fingerprinted with EST-SSR primers to provide reference for variety distinctness, authenticity, and purity identification. 【Method 】First, EST-SSR primers were screened by using the technologies