中国美利奴超细型与哈萨克羊毛囊兴盛期皮肤组织消减cDNA文库的构建.pdfVIP

中国农业科学 2012,45 15 :3154-3164 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2012.15.018 中国美利奴超细型与哈萨克羊毛囊兴盛期皮肤组织 消减cDNA 文库的构建 1,2,3 2,3 1,2,3 2,3 2,3 1 2,3 2,3 1,2,3 杨剑波 , 甘尚权 , 李 晶 , 高 磊 , 杨井泉 , 张 科 , 杨永林 , 沈 敏 , 石国庆 1 2 3 （石河子大学动物科技学院，新疆石河子 832000； 新疆农垦科学院畜牧兽医研究所，新疆石河子 832000； 新疆兵团绵羊繁育生物技术重点实验 室，新疆石河子 832000 ） 摘要：【目的】筛选影响绵羊羊毛性状的重要候选基因，为研究羊毛性状形成的分子机制奠定基础。【方法】 利用抑制性消减杂交技术构建中国美利奴超细型和哈萨克羊兴盛期皮肤组织间正、反向消减cDNA 文库，并对差异 基因进行测序和生物信息学分析；应用半定量RT-PCR 和实时荧光定量RT-PCR 对部分差异基因进行鉴定。【结果】 ①从所构建绵羊皮肤组织的正、反向消减cDNA 文库中分别获得 153 和143 个ESTs，其中分别包括5 和4 个未知 功能的ESTs，推测可能是新基因；对部分已知功能ESTs 进行了GO 聚类分析、通路分析和蛋白互作分析，结果显 示粗、细毛羊之间存在一定差异；②文库中的3 个差异基因KRTAP8-2、Trichohyalin 和KRTAP3-2 均能在皮肤中 特异性地高表达，其中KRTAP8-2 和Trichohyalin 基因在中国美利奴超细型羊皮肤组织中的表达丰度分别是哈萨 克羊的3.45 和2.07 倍，而KRTAP3-2 基因在哈萨克羊皮肤组织表达丰度是中国美利奴超细型羊的1.87 倍。【结论】 成功构建了中国美利奴超细型和哈萨克羊皮肤组织间抑制性消减cDNA 文库，初步筛选出一批可能影响羊毛性状的 差异表达ESTs。 关键词：抑制性消减杂交; 中国美利奴羊; 哈萨克羊; 皮肤 Construction of Subtractive cDNA Library of Skin Tissue in Follicle Anagen Between Chinese Merino and Kazakh Sheep 1,2,3 2,3 1,2,3 2,3 2,3 1 YANG Jian-bo , GAN Shang-quan , LI Jing , GAO Lei , YANG Jing-quan , ZHANG Ke , YANG Yong-lin2,3, SHEN Min2,3, SHI Guo-qing1,2,3 1 2 College of Animal Science and Technology, Shihezi University, Shihezi 832000, Xinjiang ; Animal Husbandry and Veterinary 3 Institute, Xinjiang Academy of Agricultural and Reclamation Science, Shihezi 832000, Xinjiang; Key Laboratory of Sheep Breeding and Development Technology of the Xinjiang Production and Construction Corps, Shihezi 832000, Xinjiang Abstract: 【Objective 】The aim of the study is to screen important candidate genes influencing wool traits in sheep, and to lay a theoretical foundation for exploring the molecular mechanism of wool traits formation. 【Method 】Using suppression subtractive hybridzation SSH technique, positive and reverse subtracted cDNA library between skin tissue in follicle anagen of Chinese Merino superfine type and Kazakh sheep was constructed, respectively. Genes