中国水稻条斑病细菌avrBs3_PthA家族基因的克隆和序列分析.pdfVIP

中国农业科学 2005,38 5 :929-935 Scientia Agricultura Sinica 中国水稻条斑病细菌avrBs3/PthA 家族基因的克隆和序列分析 邹丽芳, 陈功友, 武晓敏, 王金生 南京农业大学植物保护学院/农业部植物病虫监测与治理重点开放实验室， 南京 210095 摘要: 水稻条斑病细菌（Xanthomonas oryzae pv.oryzicola, Xooc ）和水稻白叶枯病菌（X. oryzae pv. oryzae, Xoo ）是稻黄单胞菌种下的致病变种，是水稻上的模式病原菌。用Xoo 无毒基因 avrXa3 对应的 NLS 和 AD 区域的 DNA片段构建探针，筛选 Xooc 基因文库，再通过酶切归类和Southern杂交分析，从 Xooc 中获得2个avBs3r/PthA 家族基因克隆，分别被命名为 avr/Pth13 和 avr/Pth14。序列测定结果显示，它们与 avrBs3PthA 家族成员，几乎 一样的5′端和3′端、1个亮氨酸拉链（leucine zipper, LZ）、3个核定位信号（nuclear localization signal, NLS）和1个酸性转录活化域（acidic transcriptional activation domain, AD），不同的只是102 bp重复单元 的重复次数不等：avr/Pth13 基因102 bp重复5.5次，avr/Pth14 基因为 19.5次。蛋白质水平上同列比较发现， AvrBs3/PthA 家族成员 34aa 重复单元的第 12 和第 13 位氨基酸为 HD 的至少需要 3 个，才可能满足毒性或无毒性 功能。将 A avr/Pth13 和 avr/Pth14 基因分别导入 Xoo 菌株 PXO99 中之后，在抗水稻白叶枯病近等基因系上测定其 致病性，发现 A A avr/Pth13 基因增强了PXO99 的致病能力，而avr/Pth14 基因则减弱了PXO99 的致病力。以上结果 提示，Xooc 与 Xoo 一样，都存在 avrBs3/PthA 基因家族的无毒基因。从 Xooc 中克隆 avr/Pth13 和 avr/Pth14 基 因在国内外尚属首次，并且avr/Pth13 基因目前是该家族的最小成员。 关键词：水稻条斑病细菌；avrBs3/PthA 基因家族；Southern杂交；致病性 Cloning and Sequence Analysis of Diverse Members of avrBs3/PthA Family of Xanthomonas oryzae pv.oryzicola ZOU Li-fang, CHEN Gong-you, WU Xiao-min , WANG Jin-sheng Key Laboratory for Monitoring and Management of Plant Diseases and Insects , Ministry of Agriculture / Department of Plant Pathology , Nanjing Agricultural University , Nanjing 210095 Abstract: Xanthomonas oryzae pv.oryzicola Xooc and X.o .pv.oryzae Xoo are two pathovars on rice. An EcoRI-BamHI DNA fragment, corresponding to the coding region NLS and AD of AvrXa3 of Xoo , was used as a probe to screen the genomic library of Xooc . Twenty three avrBs3/PthA gene clones were obtained after positive clones of the library were digested by EcoRI endoenzyme and proved by Southern blot with the probe. Sequencing randomly selected clones, avr/Pth13 and avr/pth14, indicated that they were the members of avrBs3/PthA family of Xanthomonas pathogenic bacteria. The two putative proteins w