家蚕表皮几丁质合蛋白的纯化与鉴定.pdfVIP

摘要 摘要 家蚕作为一种完全人工驯化的经济昆虫，拥有良好的饲养体系和遗传繁殖体系，其个体 适中，已被认为是研究鳞翅目昆虫理想的模式生物之一。2004年家蚕基因组测序完成，大量 的序列信息得到注释。结合家蚕cDNAs序列，构建了家蚕理论蛋白质库，为家蚕蛋白质组学 研究提供了检索数据库。 昆虫表皮是覆盖机体的细胞外结构，是虫体直接与外在环境接触的界面，行使多种生物 学功能。为昆虫提供有效的保护，以抵御环境中有害因素的影响；提供可交的机械性能，营 造昆虫发育的最优环境。 昆虫表皮主要由几丁质和蛋白质基质组成。表皮蛋白和几丁质通过自我组装形成复合物 的超高级结构，这种结构是昆虫表皮行使功能的基础。序列分析发现与几丁质结合的蛋白质 即使在不同物种中，仍然拥有较保守的结构域，且在表皮中扮演着重要的角色，其中主要的 蛋白能与几丁质结合。而体外表达实验却发现具有CPF结构域的表皮蛋白不能与几丁质结 合。 本实验利用强阴离子去污剂SDS抽提家蚕幼虫表皮中难溶的几丁质结合蛋白。透析去 除SDS后，将得到的蛋白质样品用于体外结合实验，分离得到与几丁质结合的蛋白质组分。 进一步采用LC．MS／MS串联质谱进行鉴定。在检