唐菖蒲再生体系立及npr1基因的遗传转化.pdf

摘要 唐菖蒲(∞d幻ms hybridus)是鸢尾科唐菖蒲属多年生单子叶球根花卉，是世界著名的 四大切花之一。唐菖蒲的切花生产是以无性繁殖的方式生产球竿作为栽培材料，因此附着在 球茎上的致病菌会不断传染给后代种球，经过多年积累导致种球种植过程中病害严重发生。 应用抗病品种是病害防治最直接有效的方法，但唐菖蒲抗病种质资源匮乏加之常规育种 周期长，使得抗病品种远远不能满足生产上的需求。随着生物技术的迅猛发展，运用基因工 程手段将外源抗病基因导入植物中．为唐菖蒲抗病育种带来了新的希望。 本研究在由唐菖蒲球茎芽诱导出的胚性愈伤组织基础上，建立了胚性愈伤组织经器官发 生途径和经体细胞胚发生途径两套再生体系．并对器官发生途径中不定芽的壮苗培养和体细 胞胚发生途径中胚状体的发育过程进行了较深入的研究。在此基础上以唐菖蒲愈伤组织为基 因转化受体，将植物广谱抗病基因(NPRl基因)通过农杆菌介导转化唐菖蒲，建立了稳定的 遗传转化体系，得到了经PCR检测为刚性的植株。本研究的主要结果如下： 1．唐菖蒲愈伤组织经器官发生途径再生体系：以球茎芽切片为外植体，胚性愈伤组织 为 诱导率达92．7％；壮苗培养基为 MS+6-BA0．5mg／L+NAA0．1m∥t,， mg／L．生根率达100％，移栽成活率达100％。 2．唐菖蒲愈伤组织经体细胞胚发生途径再生体系：以球茎芽切片为外植体，胚性愈伤 组织诱导培养基为MS+2年D4．0mg／L-I-6_BA0．5mg／L；胚状体诱导培养基为 体首先接种于MS培养基使其充分发育，之后转入MS+6．BA2．0mg／L培养基中诱导发芽，在 转入MS培养基中使其形成完整植株。通过石蜡切片法和临时压片法对胚状体的发育过程观 察发现，首先外植体表层薄壁细胞经脱分化恢复分生能力，形成愈伤组织，随后在愈伤组织 表面形成许多瘤状突起即胚性细胞团，胚性细胞团继续发育成球形胚、盾形胚，最后发育成 熟形成完整植株。 3．唐菖蒲遗传转化体系：以胚性愈伤组织为基因转化受体，将胚性愈伤组织预培养14 养直至抗性愈伤组织的产生。将产生的抗性愈伤组织分别经器官发生途径和体细胞胚发生途 径进行再生。 4．转化植株的PCR检测：经愈伤组织器官再生途径得到的69株抗性植株中有3株呈阳 性，阳性率为43％，转化率为0．3％。经愈伤组织体细胞胚再生途径没有得到抗性植株。 关键词：唐菖蒲；胚性愈伤组织；体细胞胚：农杆菌介导；NPRl基冈 ofPlant and Establishment RegenerationSystem on Gladiolus StudyAgrobacterium-mediated NPRlGene Transformationof Abstract GladiolⅢs(Gladiolushybridus)isoneofperennial to cutflowers．1rhe which ofiridaceousandisoneofthefourworld-famous belongsthe—adiolus asexual cutflower of the ofculTfl gladiolus，so productionby reproductionwayduring production cornl accumulationof afew ontheold wouldinfe