大菱鲆类胰岛素生长因子和结合蛋白基因克隆及表达的研究.pdfVIP

大菱鲆类胰岛索样生长因子和结合蛋白基因克隆及表达的研究 大菱鲆类胰岛素生长因子和结合蛋白基因克隆及表达的研 究 摘 要 大菱鲆@印^脯口砌淞m似拥淞)为我国北方沿海主要养殖品种，具有重要的经 济价值。本文以人工养殖大菱鲆为研究对象，采用分子生物学相关技术方法，对 的功能进行了分析，结果如下： 1．大菱鲆类胰岛素样生长因子结合蛋白一1(IGFBP一1)基因克隆与表达 本实验克隆得到大菱鲆类胰岛素样生长因子结合蛋白一l(IGFBP．1)基因 酸序列包括3个区域，分别为保守的N端和C端以及高度分散的L区域，并且 在N端和C端存在18个半胱氨酸残基。组织表达分析表明，IGFBP．1基因在肝 脏、脾、心脏、胃、肾脏、肠中均有表达，其中以肝脏和脾中的表达量最为丰富。 通过RP．PcR方法检测IGFBP一1基因在大菱鲆胚胎及仔稚鱼时期的表达情 况，从未受精卵开始表达，在原肠期达到最低，在之后的发育期里显著升高，并 在稚鱼期达到最高值。结果表明，IGFBP．1基因在大菱鲆的早期发育过程中起着 重要的生理作用。 2．大菱鲆类胰岛素样生长因子结合蛋白一2(IGFBP一2)基因的克隆和表 ～．L 还 采用RACE克隆方法得到大菱鲆类胰岛素样生长因子结合蛋白一2(IGFBP-2) IGFBP．1基因类似，氨基酸序列包含3个区域，分别为保守的N端和C端以及 高度分散的L区域，在N端和C端存在18个半胱氨酸残基。组织表达分析表明， IGFBP．2基因在大菱鲆成鱼各组织中分布广泛，在脑、心、肝、肾、肠中表达量 较丰富，皮、脾次之，鳃和卵巢较少，胃中有微弱表达，肌肉中检测不到表达。 大菱鲆类胰岛素样生长因子和结合蛋白基因克隆及表达的研究 使用RT-PCR的方法检测IGFBP．2基因在大菱鲆胚胎及仔稚鱼发育期的表 达，可以发现，在未受精卵和原肠期中没有表达，从胚体期开始检测到表达，并 在后面的几个时期逐渐上升，13日龄仔鱼达到最高，稚鱼略有下降，但差异不 显著，表现出与IGFBP．1基因不同的生理作用。 3．大菱鲆类胰岛素样生长因子一2(IGF一2)基因的克隆及两种类胰岛 素样生长因子(IGF一1，lGF一2)基因的表达 采用同样的方法克隆得到大菱鲆类胰岛素样生长因子一2(IGF．2)基因cDNA 序列包括信号肽区，高度保守的B，C，A，D区域，以及E区域，其中在B区域和 A区域中包含6个半胱氨酸残基。 采用RP．PCR方法检测IGF．1和IGF．2基因组织表达，发现这两种基因均有 较广泛的表达模式，其中IGF．1基因除了在肠中没有检测到表达，其他组织均检 测到表达，肝脏中的表达量最丰富；IGF．2基因在所有组织中均检测到表达，肌 肉中的表达量较低。在胚胎仔稚鱼发育期内‘，IGF．1基因除了在未受精卵内表现 出一个较高的水平，从原肠期开始，表达水平逐渐上升；IGF．2基因在原肠期表 现出一个较高的表达量，其他各期均有表达，差异不显著。 关键词：大菱鲆(兜印，7拍a，删s腑x，删s)类胰岛素样生长因子结合蛋白一1， 一2(IGFBP一1，一2)类胰岛素样生长因子一1，一2(IGF一1，一2) 大菱鲆类胰岛素样生长因子和结合蛋白基因克隆及表达的研究 Studieson and ofIGF cloningexpressionanalysis and IGFBPin genes turbot做叩^历口加珊，咒皿砌“s) AbStract Asoneof也emainseawater intllenorthcoaStalareaof breedings China，tIlrbot (＆op^搋口Zm懈m锻fm獬)haus Va：Iue．This 0n imp删economic mainly咖dy