小黑杨pnsg20ox1基因的克隆与表达分析.pdfVIP

摘要 摘要 植物整个生命周期中的生长和发育过程，特别是在林木木材形成方面具有重要作用。 GAs的生物合成是由一系列酶的催化完成的，其中GA20氧化酶是其生物合成的限速 simonii 酶。为了利用分子育种对小黑杨(Populusxp．nigra)木材形成进行遗传改良， 从而培育出生长速度快、纤维长度大的优良纸浆材小黑杨新品种，本文对小黑杨GA20 氧化酶基因进行了初步研究，主要结果如下： 克隆并获得小黑杨GA200xl基因。利用已知的与小黑杨亲缘关系较近的几个物种 678 段，之后利用RACE技术获得一条l bp的eDNA序列。经序列比对分析，其与毛果 码序列为l158 kDa，理 bp，共编码385个氨基酸，PnsGA200xl蛋白的分子量为44．04 论等电点为5．97，是20G．FelI Oxy基因家族的成员。 叶、顶端分生组织的表达情况，结果表明：该基因在上述组织中均有表达，但其相对表 较高，在未成熟木质部、韧皮部、顶端分生组织和成熟叶中则表达丰度中等，而在叶柄 中有少量表达，在节间组织中表达丰度相对最低。 PCR和RT-PCR检测，证明外源基因已经整合到烟草基因组中并成功转录翻译。测定过 Inason木质素含量，方差分析表明，转基因烟草的Kl嬲on木质素含量并无明显变化， 而综纤维素含量和纤维长度比对照组均有显著的提高，且不同株系之间也存在显著差 异。初步证明过表达PnsGA200xl基因在不同转基因株系中对纤维素生物合成的影响有 所不同，而对木质素的生物合成并无明显影响。 关键词小黑杨；赤霉素；PnsGA200xI：实时荧光定量PCR；纤维素；木质素 Abstract Abstract ofall kindof important Gibberellis(GAs)consist plantgrowthregulators，whichplay rolesin of and 20一oxidase important manyaspectsplantgrowthdevelopment．Gibberellin a that the inGA (GA200x)iskeyenzymenormallycatalyzespenultimatesteps biosynthesis． To a withfast rateand fiber moleculer generategoodpulpwood growth long lengthby didsomeresearchabouttheGA200xfrom simoniixp． methods，we breeding gene Populus nigra． basedonGA200x ofdifferent degenerateprimers genesecquences Using species，one was novel ofGA200x obtained