dcc基因缺失使表达plt;#39;230gt;bcrabl造血细胞恶性转化的研究.pdfVIP

中文摘要 目 的 癌的发生涉及癌基因和抑癌基因这两类基因中的多个基因的变化，经 过相应的多阶段发展而形成其恶性表型过程。癌基因激活促使细胞恶性转 化，引起癌的发生；抑癌基因的缺失将导致细胞失控性生长和分化，促使 细胞恶性增殖。已有的研究表明，造血器官的恶性疾病如慢性粒细胞白血 病(chronic myelogenoIIs RB基因等抑癌基因有关。为了研究癌基因和抑癌基因在白血病及NB等 DCC+／一鼠、Bcr／Abl“。xDCC+／+正常鼠，并利用它们研究其发生白血 病的表型和分子生物学行为，探讨白血病及NB等实体瘤发生的机制。 材料和方法 一、材料 DCC+／一鼠、Bcr／ 配，产生P230Bcr／Ablre一鼠、DCC+／一鼠、Bcr／Ablw—x Abl“一X DCC+／+正常鼠。 引物及探针、DCC基因引物、RNA提取液、cDNA合成试剂盒，乙酸钠一柠 檬酸缓冲液(pH：4．3)为流动相。 3．主要仪器：LC一152动物用全自动血细胞计数仪(日本)，PCR扩增 De- Sequence tection System)(美国)，分析软件AppliedBiosystems公司(日本)提供，紫外 C18柱，464 分光光度计(SchimadzuUV一1201日本)，HPLC(采用Resolve 电化学检测器)检测仪。日立7100全自动生化分析仪。 二、方法 小鼠从生后第5个月开始，每隔一个月检测一次外周血白细胞 粒细胞的百分数。光学显微镜下观察各脏器的病理组织学变化和计数脾脏 HPLC检测血VMA／Cr；HVA／Cr含量。 结 果 1．p230Bcr／AblTv一转基因鼠经过17个月的连续观察，生后13个月出 现了增殖性骨髓像以及血小板显著增多，白细胞轻度增加，中性分叶核比值 增加，轻度贫血。脾脏中性分叶核浸润，其它组织、器官未见异常改变。 2．DCC+／一模型鼠生后13个月出现血小板显著增加，轻度贫血，中 性分叶核比值增加，白细胞正常。脾脏肿大，巨核细胞、中性分叶核浸润，其 它如肝、结直肠、肾上腺等组织、器官未见异常改变。血VMA／Cr；HVA／Cr 含量检测。 3．P230Bcr／Abll旷x DCC+／一鼠生后11个月开始WBC、中性分叶核 比值、PLT均显著增多，轻度贫血。脾脏肿大，巨核细胞、中性分叶核浸润， 其它组织、器官未见异常改变。 4．p230Bcr／Abl*∥一转基因小鼠被转染基因骨髓呈高表达，其次为脾脏、 肝．而P230Bcr／Abll小x 表达，其次为骨髓、肝。 结 论 DCC+／一鼠均 1．P230Bcr／Ablre一鼠、DCC+／一鼠、P230Ber／AblTM—x 发展为MPD，且P230Bcr／Ablre—x +／一鼠早2个月发病。DCC+／一鼠未见急性自血病，神经母细胞瘤，结直 肠癌等肿瘤发生。 粒细胞白血病及急变机制以及包括免疫治疗在内的Phl染色体阳性的白血 病治疗新药特药开发的生物学模型 3Bcr／Abl癌基因激活和DCC抑癌基因的缺失共同作用加速造血细胞 恶性转化，进而证明了DCC基因作为一种抑癌基因在癌变过程中有促进作 用。 HVA ·2· of Deletion DCC