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PCR—RDB技术快速检测泌尿生殖道致病性支原体的研究 中文摘要 【目的】 建立PCR_I①B技术快速检测泌尿生殖道致病性支原体；用临床常用支原体 检测方法结合其他分子生物学技术评价PCR．RDB技术；将PcR．RDB技术用于 I临床检测中，探讨不同人群中支原体感染情况。 【方法】 1 采用巢式PCR方法扩增四种支原体：以16SrI斟A基因为扩增靶序列设计通 用引物及特异性探针；优化Up、Uu、Mg和Mh的PCR扩增方法。 2 法学的优化。 3 PCR．RDB方法学评价：1)敏感性分析：通过Up、Uu和Mh固体培养物定 量进行PCR．RDB检测的敏感性分析；采用DNA绝对含量测定进行 析探针的特异性：PCR．ImB检测标准菌株的特异性分析；PCR．RDB检测 泌尿生殖道其它常见菌的特异性评价；PCR-I①B法、固／液体培养法及 Mg．PCR技术检测临床标本结果的对比评价；用RFLP方法鉴定PCR_I①B 检测混合感染样本。 4方法学的应用：将以上所建立的PCR—ImB方法应用于临床样本的检测中； 探讨不同人群支原体感染状况。 【结果】 l 选择16SrRNA基因为靶序列，设计出两对通用引物及各支原体特异性探 Star5．0、DNA 针，在DNA Club及GeneBaIll(中经比对优化后应用。 2巢式PcR扩增出四种支原体的标准株，2％琼脂糖凝胶电泳均显示298bp清 晰明亮条带。 3 PCR．RDB方法经优化试验显示，lOmmo儿为探针浓度和42℃杂交温度杂 交过夜显示较好的结果。 4 为6．5pg／ul。 5 GeneBan】(Blast分析探针的特异性显示与泌尿生殖道其他常见病原体无交 叉反应；PCR．ImB结果显示4种探针仅与相应支原体标准株产生特异性杂 交。 6 8 PCR．I①B法检测60例临床拭子标本共检出支原体阳性19例，分别为Uu 1例、Mh 1例：固、液分离 1例、Up+Uu 例、Up6例、Mg 2例和Uu+Mg 培养法检出17例，包括UUl6例(未分群)，MH 1例；特异性Mg-PCR 7用PCR．ImB方法检测390例临床拭子标本，包括性病门诊患者279例，女 性性工作者111例，共检出149例支原体阳性标本。支原体总体感染率为 38．2％，性病门诊患者、女性性工作者感染率分别为27．2％、68．5％；性病门 诊女性患者感染率高于门诊男性(尸0．01)；女性性工作者感染率高于性病门 诊女性(尸0．01)。性病门诊患者以单一感染为主，女性性工作者多见混合感 与女性性工作者的感染率分别为2．87％、7．2l％。 【结论】 l 的单一感染和混合感染，对于临床NCNGU的鉴别诊断有重要意义。 2 PCR-砌)B技术在致病性支原体诊断方面克服了培养方法的不足更具优势， 与其他方法比较有好的一致性，值得临床推广应用。 3 性病门诊患者与女性性工作者支原体感染有较大差异，加强致病性支原体 感染的分子流行病学研究对于有效STD有重要意义。 【关键词】 微小支原体；解脲脲原体；人型支原体；生殖支原体；聚合酶链反应；反向斑 点杂交； Detec“onof pathogenic删旧叩肠沏嬲inGenitourinarytractby chainreac“on-reVersedotblot polymerase hybridization lObjec“VeJ To es诅bIishthemethodofPCR—RDBfor detectionoft王le