rna干扰sab1基因对乳腺癌干细胞wnt信号通路的影响.pdf

摘要 舢IJlIFJI JJllllJlllJJlll／llll JllJJlJl／JllJJJllJ 摘要 Y24271 40 背景： 乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤，复发和转移是导致乳腺癌治疗失败的主 stemcells，CSC)，CSC 要原因。研究显示肿瘤中存在着少量肿瘤干细胞(cancer 是肿瘤发生、转移和复发的根源之一。CSC受一系列信号转导通路的调控， ATrich Wnt／p—catenin通路是其中的一种。SATB1(special binding sequence Wnt／13．catenin通路影响肿瘤发生、浸润、转移及复发。 目的：采用RNAi抑制乳腺癌干细胞SATBl表达，观察乳腺癌干细胞wnt．1、 方法： 组含干扰SATBl序列并包装至慢病毒载体。 2为对照需要及摸索感染条件，将不含干扰序列的空包病毒转染MCF．7细 胞得MCF．7／siControl作为阴性对照。 3 4组慢病毒载体分别转染MCF．7细胞，然后采用实时荧光定量PCR和 Western 基因抑制效果最好的MCF一7细胞(MCF一7／siSATBl)。 4根据乳腺癌干细胞的特异性免疫标记CD44+CD24‘，通过流式细胞术分选 1干细胞。 mRNA 5实时荧光定量PCR检测上述三组乳腺癌干细胞writ．1、13-catenin 表达。 结果： 1 108TU／ml。 经包装产生的病毒滴度均大于1．0x 摘要 2 空包病毒载体及上述4组SATBl基因干扰的重组慢病毒分别转染MCF．7细 胞，2—3天后GFP荧光表达均70％，证实重组慢病毒转染MCF．7成功。 MOI=20，添加完全ENi．S组的转染效率最高为94．85％。 3 4种重组慢病毒感染的MCF．7细胞中，SATBl／GVl15．RNAi#4组MCF．7细 胞的SATBl 组MCF．7细胞的SATBlmRNA抑制率为60．3％，蛋白抑制率46．68％，符合 MCF．7细胞作为 RNA干扰要求(大于30％)，将SATBl／GVll5一RNAi#4 MCF．7／siSATB1。 4 @MCF．7／siSATBl：0．79％。然后采用流式细胞分选术成功分选MCF．7、 MCF．7／siControl和MCF．7／siSATB1干细胞，并提取mRNA。 5 阴性对照组和空白对照组比较，经SPSSl7．0两个独立样本的t检验计算， 0．367+0．17，与阴性对照组和空白对照组比较，经SPSSl7．0两个独立样本的 为0．307士0．17，与阴性对照组和空白对照组比较，经SPSSl7．0两个独立样 13-catenin的mRNA表达降低。