spred2调慢性粒细胞性白血病细胞生物学特性及机制.pdfVIP

中文摘要 Spred2调节慢性粒细胞性白血病细胞生物学特性及机制 摘要 慢性粒细胞性白血病(Chronic Myelocytic 1)染色体易位。易位形成的融合基因编码具有高度酪氨酸激酶活性BCR-ABL t(9；22)(q34；ql 蛋白并组成性激活多条信号通路，使细胞处于非依赖生长因子的高度增殖状态。根据CML 病程特点，大致可分为慢性期、加速期和急变期三期。慢性期的细胞尚具有一定分化潜能， kinase 的调节机制研究，研发新型酪氨酸激酶抑制剂(tyrosine 下游信号通路的抑制分子，对CML治疗的具有重要意义。 通路在促进细胞增殖、存活，抑制细胞凋亡，调控细胞分化的过程中发挥极为重要的作用， 已成为肿瘤治疗的新靶点。多种ERK通路小分子抑制剂进入抗肿瘤临床试验阶段，有望发展 成为新型抗肿瘤药物。除了ERK小分子抑制剂外，细胞内还有多种ERK内源性抑制分子， withEVHl relied 它们在维持细胞增殖平衡中发挥着重要的调节作用。Spreds(Sprouty region)造血、 细胞增殖、血管与淋巴管的生成具有重要调节作用，在肝癌、变应反应性疾病和I型神经纤 是否具有调控作用?其调控机理是什么?针对上述科学问题，我们进行了以下实验研究。 首先，我们利用本实验室成熟的重组腺病毒制备平台，成功制备了可以高效感染造血细 为模板，扩增Spred2 经PCR、Western 表达。(4)扩增、纯化病毒颗粒：用HEK293细胞扩增重组腺病毒Ad5fl IV 中文摘要 第二，我们根据Gene 对候选siRNA序列。经脂质体瞬时转染HepG2细胞，Western 选出最有效干涉靶点，其序列为：Sense 源性Spred2在蛋白水平的干涉效率均可达到70％以上，可用于后续研究。 第三，利用过表达载体和干涉载体工具，建立相应细胞模型，从正反两方面观察Spred2 ofinfection)感染K562细胞，48h后获得高表达 Ad．GFP或Ad．null以100MOI(multiplicity blot blot检测 active 活性Caspase3与PARP，或用PE．anti 诱导的CML 处理的K562细胞免于凋亡。Spred2过表达诱导CML h、8h、12h)，Western imatinib处理不同时间(4 处理，或用50M 达。综合分析以上结果，我们认为Spred2参与imatinib诱导的CML细胞毒性作用。 V 中文摘要 A) mRNA水平。发现稳定干 表达。Realtime．PCR检测巨核细胞相关转录因子GATA．2与Egr-1 号通路的影响：Western 对