b7-h1分子导功能性t细胞亚群下调淋巴细胞增殖.pdf

共刺激分子B7一H1参与诱导人体新的功能性 T细胞亚群下调淋巴细胞增殖 中文详细摘要 在异体皮片中嵌入少量自体(受者)表皮细胞，可有效地诱导局部免疫 耐受，为嵌入的自体表皮在创面的匍匐生长和最终覆盖创面赢得时间。这一 混合皮肤移植技术的应用，拯救了数以千计大面积深度烧伤的患者。初步的 机理研究揭示，耐受形成的机制之一是自体表皮中的角朊细胞(auto—KC)通 过表达B7．H1共刺激分子，激活了类似T}12的T细胞亚群，通过分泌细胞因 子IL．10抑制了排斥反应。但激活的细胞是否确为11127是否存在其它调节 性T细胞(Tr)?以及通过什么免疫学途径和机制诱导了调节性T细胞介导 的免疫耐受? 本论文从下列几个方面对此开展深入研究。首先确认auto-KC在同种异 体反应中的免疫调节作用，分析诱导正常表皮细胞中的KC表达B7一H1的条 件，及其对T细胞增殖和分化的影响。然后分析B7一H1的配体分子PD-l在 的信号通路是否直接导致n11／Th2极化，及其对Tr分化的影响。同时探讨 auto．KC作为非专职性APc，参与同种异体抗原阅接递呈中的MHCII类分 子限制性。最后分析B7．H1阳性细胞激活的T细胞亚群表面标志和细胞因子 分泌格局的动态变化，初步界定所诱导的具有调节功能的人体T细胞亚群的 生物学特性。 所在课题组先前的工作，是采用同种异体混合表皮淋巴细胞培养体系 引入自体KC的关系，以简化实验系统。发现就auto．KC对淋巴细胞增殖反 应的抑制而言，两个系统(MELC和NLC)得到的结果一样，当以异体角朊 对同种异体应答具有普遍性，从更广泛的意义上证明了KC具有负向免疫调 节作用。在机理研究中发现，除了同种异体抗原，联合应用佛波酯TPA和IFN．y 也可诱导传代培养的(因而是纯化的)角朊细胞表达B7．H1，并上调其MHC II类分子的表达。该处B7．H1作为为第二信号，可以协同抗CD3激活初始T 分泌上调，IL-2和IL一4水平很低，甚至检测不出，提示B7．Hl阳性角朊细胞 诱导了一种新的功能性T细胞亚群。为了了解这一T细胞亚群和Thl／Th2的 关系，特别是1112激活的关系，通过细胞因子诱导、抗细胞因子抗体的封闭 并用抗CD3抗体交联，使脐带血细胞分化成Thl或n12。发现两群细胞PD—1 分子都有表达，提示B7-H1能够区分性活化Th2，不是通过其受体PD．1分 子，有可能通过新近提出的另一类B7．H1的受体。 将带有金长B7．H1基因的质粒转染人角朊细胞株A431，得到可表达 II类分子表达后，可以用基因分型 B7．H1分子的KC。以IFN-y上调其MHC 和T细胞相互作用中II类分子限制性的研究。选取此类Il类分子和B7一Hl 双阳性的KC，使之与II类等位基因背景不同的PBMC进行组合，以可溶性 II类分子限制性的问接递呈 抗原诱导的T细胞增殖体系，直接证明了MHC 在KC诱导抑制中的作用，其中DQ分子尤为重要。此外，用抗CD3和／或抗 CD28抗体分别作为第一和第二信号的来源，建立了T细胞体外增殖体系， 因子分泌和细胞表面标记的影响。发现当l；之B7-H1阳性A431细胞提供第二 度增殖(cpm 殖反应受到抑制(cpm 闭型单抗，抑制缓解。说明B7．Hl阳性A431细胞具有双向效应：当CD28 不参与共刺激时，由B7-H1发挥共刺激作用，协同抗CD3抗体§l起T细胞 增殖；一旦T细胞从抗CD3和抗CD28抗体获得第一和第二信号出现高度增 CD45RB””T细胞亚群比例增加，呈现典型的Trl细胞表型。这表明，针对 增殖性T细胞应答(如抑制排斥)，表达B7-Hl的非专职性抗原提呈细胞KC， 可选择性诱导人体调节性T细胞(Trl)的分化，发挥负向调节作用。 调节性T细胞(如Trl)。不仅深入探讨了混合皮肤移植诱导耐受的免疫学机 制，并可为临床移植耐受诱导提供新的途径，包括应用于其它脏器移植，比 如，诱导B7·Hl阳性的APC、激活血管内皮细胞表达B7．H1或大量输注受 者MHC背景相同的B7一H1阳性细胞，以及能专一性分泌IL．10的抑制性T 细胞亚群，有望抑制移植物的急性细胞性排斥。 关键词：角朊细胞B7-H1共刺激分子IL．10