cox-2、hlh1和hmsh2在微卫星不稳定结直肠癌中的表达及甲基化的影响.pdf

中 文 摘 要 COX-2,hMLHI和hMSH2在微卫星不稳定结直 肠癌中的表达及甲基化的影响 摘 要 目的:胃肠道肿瘤是严重威胁人类健康的疾病，其中结 直肠癌是当前最常见的恶性肿瘤之一川。结直肠癌的发生是 一个山遗传和环境因素共同参与的多方面、多步骤的发展过 程，涉及多种基因突变的积累，揭示结直肠癌的分子发生机 制己成为医学界研究的热点。 微卫星不稳定 (microsatelliteinstability,MSI)是指在复 制过程中由于错配修复基因突变而引起的DNA基因组中简 单重复序列的增加或丢失，也称为复制错误阳性或复制错误 表型。H前人类的错配修复酶 (mismatchrepairenzyme, MMR)系统含有9个基因:hMLH1,hMLH3,hPMS1,hPMS2, hMSH2,hMSH3,hMSH4,hMSH5,hMSH6，其中hMLHl (humanmut-1homologue1，hMLHl)和hMSH2(humanmut-s homologue2,hMSH2)是人类错配修复系统中功能最重要 的两个基因，主要作用是保持遗传物质的完整性和稳定性， 保证DNA复制的忠实性。如果这些错配修复基因功能发生 缺陷或活性降低，复制过程中出现的错误不能及时被纠正， 就会导致MSl的出现，使整个基因组不稳定，随机突变率增 高，从而引起肿瘤的发生。 环氧化酶-2(cyclooxygnase-2,COX-2)是环氧化酶 (cyclooxygenase,COX)重要的同工酶之一，其主要功能是 参与多种病理生理反应，特别是与肿瘤的发生、发展有一关。 中文 摘 要 COX-2在大部分结肠腺癌和结肠腺瘤中表达升高，而在小部 分MSI结直肠癌中却是低表达或不表达的，基因启动子区域 甲基化可能是重要机制之一。另外基因启动子区域甲基化也 可使hMLH1表达下降，导致MSI的出现。 木实验主要采用分子生物学方法观察分析结直肠正常 组织、癌组织中MSI的存在情况，并在此基础 卜进一步分别 探讨MSI、微卫星稳定 (microsatelliteinstable,MSS)结直肠 癌中COX-2,hMLHI和hMSH2的表达情况，并检测MSI给 直肠癌中COX-2,hMLHI和hMSH2基因启动子区域甲基化 情况及其甲基化对蛋白表达的影响，从而探讨MSI结直肠癌 发生的分子机制。 方法 1结直肠癌中MSI的存在情况 1.1材料:手术切除新鲜结直肠癌组织42例及相应癌旁正常 组织 距〔癌组织远端10cm结直肠组织)42例。所有标本均 为手术切除新鲜标本，液氮保存。所有病例术前均未接受任 何抗肿瘤治疗，术后病理证实。 1.2选用BAT25,BAT26,D2S123,D5S346,D17S250五 个微卫星位点，采用PCR的方法来检测结直肠癌组织及相应 癌旁正常组织中MSI的存在情况。 2采用Western Blot蛋白印迹的方法来检测MS1,MSS结 直肠癌组织及相应癌旁正常组织中COX-2,hMLHI和 hMSH2蛋白表达情况。 3采用特异性甲基化PCR(methylation-specificPCR,MSP) 的方法来检测MSI结直肠癌组织中COX-2,hMLHI和 hMSH2基因启动子甲基化情况，从而研究三者在基因途径 2 中文 摘 要 上的关系。 结果 1结直肠癌及癌旁正常组织中MSI的检测 42例癌旁正常组织中，未检测到MSI的存在:而在42例 结直肠癌组织中，MSI总检出率为42.86% (18/42)，其中 MSI-H28.57%(12/42)MSI-L14.29%(6/42).BAT25,BAT26, D2S123,D5S346,D17S250五个位点MSI的检出率分别为 19.05%(8/42),16.67010(7/42),11.90% (5142),4_76%(2/42), 和7.14%(3/42);MSS总检出率为57.14%(24/42)。提示ms] 是结直肠癌发生、发展过程中的频发事件。 2COX-2,hMLHI和hMSH2在癌