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张截截硕士论文 EGb76l对过氧化氢预处理PCI2细胞的保护作用 硕士研究生： 张微微 导 师： 汪华侨教授 专 业： 人体解剖与组织胚胎学 研究方向： 中枢神经系统退行性疾病的基础研究 中文摘要 老年性痴呆又称阿尔茨海默病(A1211eimer’sdisease，AD)，是一种好发于中老 年人的神经退行性变疾病，以记忆丢失和认知功能障碍为典型临床表现。其病因 目前尚不清楚，大多认为是一种多病因疾病，与遗传、增龄、免疫功能异常、感 染等有关。大量的研究表明，氧化应激在AD等神经退行性疾病的发病中起着重 要作用。可溶性的AB、Ap原纤维、神经元纤维缠结、线粒体异常和老化等均可 引起氧化应激的发生。EGb76l的主要成分黄酮是最强的天然抗氧化剂之一，能 清除自由基，减少脂质过氧化物和脂褐素的生成与沉积，提高超氧化歧化酶 (Superoxidedismutase，SOD)的活性，保护细胞膜，调节器官组织功能，有效延缓 衰老。许多研究表明氧化预处理是减轻氧化应激对细胞损伤的有效途径。体内内 源性气体信号分子硫化氢(hydrogensulphide，H2S)可通过抑制细胞凋亡从而对 神经细胞起到保护作用。 预处理、H2S对H202引起的PCI2细胞损伤的保护作用以及各处理因素间是否 存在配伍关系，为EGb761在AD治疗中的可能应用提供实验依据。 1目的 探讨EGb761对H2S处理、过氧化氢预处理后再给予过氧化氢损伤的PCI2 细胞的作用。分别讨论EGb76l、硫化氢和过氧化氢三种处理因素对抗细胞凋亡 的作用和机制。 张微微硕士论文 2方法 2．1实验分组 根据实验需要分组如下： (1)空白对照组； (2)H202处理； (3)EGb761+H202处理； (4)H2S+H202处理； (5)EGb761+H2S+H202处理； (6)H202预处理+H202处理； (7)EGb761+H202预处理+H202处理； (8)H2S+H202预处理+H202处理； (9)EGb761+H2S+H202预处理+H202处理； 2．2分组干扰因素 应用EGb761标准品溶液，应用硫化氢钠(sodium 细胞12h。 2．3细胞的凋亡情况 测细胞凋亡的形态学变化，甲氮甲哗蓝(MTT)法检测细胞存活率，罗丹明123 (rhod锄ine membrane 123)染色FCM检测细胞细胞线粒体膜电位(Mitochon“al potential，MMP)的含量。 2．4统计学分析 所得数据结果用均数士标准差(x士s)表示，利用SPSSl0．0统计软件分析，P 0．05认为有统计学意义。计量资料多组均数比较采用方差分析。 张截截硕士论文 2结果 的H202预处理之后再进行损伤处理的组别对照未进行预处理的组别，预处理增 加了细胞生存率、降低凋亡率、增加线粒体膜电位(MMP)； H202共同作用的组别对照未进行药物处理的组别，药物组增 EGb76l与300“M 加了细胞生存率、降低凋亡率、增加线粒体膜电位(MMP)； 与300州H202共同作用的组别对照未进行药物处理的组别，药物组增加了细胞 生存率、降低凋亡率、增加线粒体膜电位(MMP)； (5)预处理组联合药物组和单纯使用药物或者预处理的组别均可以观察到细 胞生存率增高、凋亡率降低、线粒体膜电位(MMP)增加。 3结论 1． H202会引起氧化应激，从而导致PCI2细胞凋亡； 2． 以较小浓度的H202进行预处理，可以起到一定的保护作用； 3． EGb 76l可以一定程度上抑制H202引起的氧化应激对于细胞的损伤； 4． EGb 761和H202预处理能协同的抑制H202引起的氧化应激对于细胞的损 伤； 5． 保护PCI2细胞的MMP有关； 6． NaHS和H202预处理能协同的抑制H202引起的氧化应激对于细胞的损伤； 7． H202预处理同样可以抑制H202引起的氧化应激对于细胞的损伤。 关键词：阿尔茨海默病