gjb2基因三致聋缺失突变同步检测方法的建立及意义的研究.pdfVIP

删删㈣㈣㈣ Y1 目 录 一、摘要 中文论著摘要………………………………………………………………………1 英文论著摘要……………………………………………………………………．．5 二、英文缩略语………………………………………………………………………．．9 三、论文 —1厶—JL一 日IJ吞………………………………………………………………………………………………………”lO 材料与方法………………………………………………………………………．11 实验结果…………………………………………………………………………16 讨论………………………………………………………………………………………………………．．25 结论………………………………………………………………………………………………………．．34 四、本研究创新性的自我评价………………………………………………………35 五、参考文献…………………………………………………………………………36 六、附表………………………………………………………………………………39 七、附录 综述………………………………………………………………………………………………………．．41 在学期间科研成绩………………………………………………………………52 致谢………………………………………………………………………………………………………．．53 个人简介…………………………………………………………………………54 ·中文论著摘要· GJB2基因三个致聋缺失突变 同步检测方法的建立及意义的研究 刖 菁 我国听力残疾者2670万，在每年3000多万新生儿中，每1000个就有2个是 重度聋儿。耳聋的致病原因涉及环境及遗传因素，其中遗传因素占有重要的地位。 耳聋中一半左右是遗传性耳聋，另外在大量迟发性听力下降患者当中，也有许多 患者是由自身的基因缺陷而致病。近年来随着对健康的重视及社会医疗的发展， 使环境因素如感染、声损伤及其他疾病导致的耳聋逐渐减少，更加突显出遗传因 素的重要性。 耳聋涉及的致病基因数量多，迄今为止发现了超过100个基因区域和46个致病 基因，而每个基因中又散在数目众多的耳聋突变位点，因而具有较高的基因和位 点遗传异质性。国内外大量关于耳聋的研究表明：在不同种族的耳聋患者中有一 半左右是由缝隙连接蛋白-p2(GapjunctionsproteinBeta一2，GJB2)基因突变致病。 我国幅员辽阔、民族众多，且耳聋患者由于沟通障碍导致活动范围小造成了GJB2 基因突变谱在不同民族和地区间存在着差异。流行病学调查结果表明，我国耳聋 国内外多采用全测序的方法对GJB2基因进行突变检测，但是由于GJB2基因主要致 聋突变为缺失造成的移码突变，突变杂合子为重叠峰，使得DNA测序结果分析困 难，而且测序所需的设备和试剂价格昂贵，多数临床实验室无法自行检测，而委 托生物公司进行检测，导致检验周期长、测序结果不可控制。 本研究目的是建立一种适于基层医疗机构使用和大样本群体筛查的简单、快 法，并通过对GJB2基因三个致聋缺失突变在辽宁地区汉族健康无关个体和感音神 经性耳聋患者及其亲属中的群体分布和家系遗传的调查，为耳聋患者特殊群体的 婚配指导、产前诊断和产后早期诊断等提供分子生物学依据，为完善辽宁地区 GJB2基因突变谱提供基础数据。 材料和方法 1、实验样本：49位感音神经性耳聋儿童患者及其108位亲属(其中6例耳 聋患者)的口腔脱落细胞样本，来源于辽宁省康复中心。通过填写调查问卷的方 式排除非遗传因素致聋病史并经系统体检和听力检测(包括音叉试验和纯音测听) 诊断为感音神经性耳聋。197例辽宁汉族健康无关个体血液样本，来源于中国医 科大学法医血清教研室。 2、DNA提取：酚／氯仿法提取基因组DNA。 76dell 3、PCR扩增