抗菌药物敏感试验及细菌耐药性检课件要点.ppt

* 基因检测方法检测抗生素耐药性的缺点： 当样品中菌量很少时，其敏感性会大大降低。 对每一个测试的抗菌药物，均需要设计相应的分子检测方法，一次只能检测一种耐药机制。 目前仍有许多耐药机制是未知的，无法进行分子检测。 耐药基因的检测也会存在假阳性问题。 对许多耐药基因的检测方法，目前还缺乏临床对照研究以评价其准确性、重复性及临床应用价值。 * 常见的细菌耐药相关基因举例 基 因 耐药抗生素 细菌种类 基因大小bp Ant(4’） 氨基糖苷类 金黄色葡萄球菌 473 ant（6’)-la 氨基糖苷类 粪肠球菌 470 mec A β－内酰胺类 金黄色葡萄球菌 400 blaTEM β一内酰胺类 大肠埃希菌 424 cat D 氯霉素 艰难杆菌 270 * 耐药基因检测方法： 分子方法检测耐药基因的基础是 PCR。 在 PCR基础上发展的方法： 分子杂交、 DNA序列分析， 基因微振列技术等。 * PCR-序列特异性引物扩增耐药基因 标 本 提取DNA PCR扩增目的基因DNA 琼脂糖凝胶电泳 结果分析 1 2 3 4 1 2 3 4 耐药基因的的特异性引物 理想的靶序列应当是耐药基因的编码区域，而非编码区外的基因( 如插入序列或启动子序列) 。 特异性高，需要设立阴性对照。 * 基因芯片技术 芯片制备：以玻璃片或硅片为载体，采用原位合成和微矩阵的方法将寡核苷酸片段或cDNA作为探针按顺序排列在载体上。 样品制备：生物样品往往是复杂的生物分子混合体，须将样品进行提取、扩增，获取其中的蛋白质或DNA、RNA，然后用荧光标记，以提高检测的灵敏度和使用者的安全性。 杂交反应：即荧光标记的样品与芯片上的探针进行反应产生一系列信息的过程。 信号检测和结果分析：杂交反应后的芯片上各个反应点的荧光位置、荧光强弱经过芯片扫描仪和相关软件可以分析图像，将荧光转换成数据，即可以获得有关生物信息。 * 结核菌耐药基因突变检测液芯 * “细菌耐药监测网”简介 监测从住院、门诊病人分离的细菌耐药状况。 分析住院病人抗菌药物的使用情况和门诊药品的使用情况。 系统、连续地收集资料，定量分析、报告抗菌药物敏感性、耐药性的发生和分布，为制定、评估诊疗指南，如经验性治疗方案、感染控制措施等，提供有用信息。 * * 网上细菌耐药检测检索 * 广东医学院附属医院细菌耐药性分析 2009年上半年我院细菌培养耐药性分析 2009年上半年全院各类标本主要病原菌的耐药性 痰标本主要病原菌的耐药性 尿标本主要病原菌的耐药性 血液标本主要病原菌的耐药性 多重耐药菌株医院感染监控制度 ？临床科室更加直观地对自己科室感染细菌的耐药性情况有直接的了解。 某一科室 主要病原菌的耐药性 某类标本主要病原菌的耐药性 某一细菌的耐药情况 细菌耐药性分析趋势 * 细菌耐药 小结 举例说明抗菌药物的作用机制。 举例说明细菌耐药的生化机制。 分析抗菌药物的作用及细菌对抗菌药物耐药的相关性。 简述β－内酰胺类抗生素的杀菌机制及细菌对该类药物的耐药机制。 BPP ESBLs * 细菌获得性耐药产生的机制 基因突变，获得外源基因（，，，） 说明质粒、整合子、转座子在细菌耐药播散中的作用。 药物敏感试验的意义、方法及特点。 联合用药可能出现的结果 质量控制 解释名词：AST，MIC，MBC，S，R，I，Tn * 当MIC小于血药浓度中治疗浓度的下限时，则称为“敏感”，用“S”（Sensitive）表示。 当MIC大于治疗浓度的上限时，则为“耐药”，用“R”（Resistant）表示。 当MIC介于治疗浓度的上下限之间时，则为“中介度”，用“I”（Intermediate）表示 * 扩大耐药谱，治疗混合感染及严重感染； 治疗耐药菌引起的严重感染； 避免药物达到毒性剂量； 预防或延迟耐药性的发生。 * 用接种环挑取受试菌混于青霉素溶液中，室温下振摇30分钟。加入淀粉液后，再加入碘液，溶液变蓝，继续振摇。 若检测菌产生酶，则可水解青霉素β-内酰胺环变为青霉素噻唑酸，后者与碘结合，使碘淀 粉复合物转变为无色，10分钟之内蓝色消失者为产酶株。 * 　　ESBLs是英文Extended—Spectyumβ—Lactamase缩写，中文意思是超广谱β—内酰胺酶，属质粒介导，它是当前抗生素出现的新的耐药趋势之一。 若临床出现产ESBLs菌株，会在病人和医院之间及不同菌株之间相互传播，导致临床高死亡率及高比率持续性定殖，应充分引起注意 * 5．促使ESBLs出现和传播的因素及临床预防？ 　　应用第