过表达人tigr的cho细胞株构建及其抗凋亡机制研究.pdf

过表达人TIGAR 的CHO 细胞株构建及其抗凋亡机制研究 中文摘要 中文摘要 【目的】细胞凋亡（apoptosis ）是哺乳动物细胞生产抗体药物过程中限制活细 胞密度提高的关键因素之一，进而制约了抗体药物的产量。本课题采用基因工程 手段在无血清悬浮培养的中国仓鼠卵巢细胞（Chinese hamster ovary, CHO ）中过表 达一种新型凋亡调控基因TIGAR （TP53-induced glycolysis and apoptosis regulator ）， 分析该 CHO-TIGAR 细胞株在批次培养中的生长代谢、抑制凋亡等现象，探究 TIGAR 基因在CHO 细胞中抑制凋亡的主要机制，进而阐述该研究相关应用价值及 意义。 【方法】第一部分构建过表达人TIGAR 的CHO 细胞株的主要方法有：①设 计特异性引物通过PCR 扩增得到hTIGAR 基因，构建pcDNA3.0-TIGAR 真核表达 载体后转染CHO-SP 细胞并挑选阳性克隆，同时以转染pcDNA3.0 空载体的细胞作 为阴性对照。利用Real-time PCR 检测TIGAR 基因mRNA 水平表达。②在