高密度赭曲霉毒素A模拟表位噬菌体构建及其ELISA应用的研究.pdf

摘要 摘 要 决定簇空间结构的短肽，其能够与OTA抗体特异性结合，有望以其无毒、 廉价的特点成为免疫学研究中天然OTA的替代物。本研究以带有OTA模 这段序列克隆至噬菌体载体pC89S4。再运用噬菌体展示技术将OTA模拟表位短 肽以高密度展示于丝状噬菌体Ⅺ江13表面。之后对该重组噬菌体进行免疫原性 鉴定、保存方法研究以及应用研究。其主要内容如下： 1．构建带有肠激酶酶切位点与赭曲霉毒素A模拟表位序列的噬菌粒载体 出了噬茵粒pC89一COTA。对pC89．COTA测序，结果显示序列完全正确。 2．高密度OTA表位噬菌体的构建及无毒OTAELISA检测方法的建立 通过丝状噬菌体pⅧ展示系统，表达出了具有高密度OTA模拟表位的重组 噬菌体且模拟表位N末端连接有肠激酶酶切位点。利用肠激酶酶切该重组噬菌 体，获得了高滴度的重组噬菌体，证明了模拟表位N末端的噬菌体蛋白残余序 ELISA 列会妨碍其与OTA抗体的结合。利用高滴度重组噬菌体建立了无毒OTA 检测方法。 3．重组噬菌体表位蛋白表达量优化以及保存方法研究 通过对噬菌体加入量、IPTG诱导时间和剂量的测试，优化了重组噬菌体表 达条件，获得了大量具有高密度OTA表位的重组噬菌体。进行了重组噬菌体保 存方法的研究，寻找到了良好的重组噬菌体保护剂。 关键词： 赭曲霉毒素A；噬菌体展示；模拟表位；ELISA；噬菌粒 基金项目：国家自然科学基金(编号 II Abstract Abstract tothe Ochratoxin isashort stuctureissimilar peptide，its A(OTA)mimotope anditcall bindwiththeOTA structureofOTAmolecular specifically antibody． epitope to fornaturalOTAin OTA is becomeasubstitute immunology mimotopeexpected withthe characteristics．Inthis non-toxic，low-cost synthetic studying study,two siteatthe5’ whichcontainEnterokinase oligonucleotides cleavage complementary ofOTA were to terminal mimotope(IRPMVDP)sequenceput hybridizingby toEcoRIandBamHI withT4 annealing，andligated digestedpha